172604. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-lizin kinyerésére fermentáció útján
19 172604 20 biotin 0,05 mg/liter tiamin hidroklorid 0,05 mg/liter szójabagfehérje hidrolizátum (7% ossz. nitrogén) 2,5% pH 7,5 A táptalajok sterilizálása után mindegyik fermentort beoltottuk az előbbi inokulumtenyészetek 15 ml-ével, majd a mikroorganizmusokat 31-33 C°-on 1500 ford ./perc keverés és 1 térf./perc levegőztetés mellett tenyésztettük. A pH-t 7,2 és 8,0 között tartottuk pufferadagolással (60% ecetsav és 0,25 mól ammóniumacetát/mól ecetsav). Az 55 órás tenyésztés során képződött L-lizin (hidroklorid formában) mennyiségét a 13. táblázat tartalmazza. 13. táblázat Törzs Termelt L-lizin g/dl-ben Elhasznált ecet sav AJ-3424 7,2 22% AJ-3425 6,1 24% No. 872 4,0 32% 9. példa Brevibacterium lactofermentum AJ-3424, AJ—3425 és No. 872 törzseket a 8. példa szerinti inokulumtáptalajra oltunk, mely azonban ammóniumacetát helyett 0,5% etanolt tartalmaz, a karbamid mennyisége pedig 0,3%. Az inkubálást 31 C°-on 18 órán át végezzük keverés és levegőztetés mellett. Az így nyert tenyészetek felhasználásával a főfermentációt a 8. példa szerinti módon végezzük, azzal a különbségei, hogy a táptalajban ammóniumacetát helyett 1% etanolt és 0,5% ammóniumszulfátot használunk, a glükóztartalom pedig csak 1%. A fermentáció során a pH-érték 7,2 és 8,0 közötti értéken tartása ammóniagáz-bevezetéssel történik. A folyamat során az alkoholtartalmat gázkromatográfiával követjük és amint a közeg etanoltartalma 0,3% alá csökken, etanolt adagolunk a rendszerbe. 48 óra elteltével a fermentlevekben jelenlevő L-lizin hidroklorid mennyiségét a 14. táblázat mutatja. 14. táblázat Termelt Törzs L-lizin g/dl-ben Terméshozam az elhasznált etanolra vonatkoztatva %-ban AJ-3424 6,6 26 AJ-3425 5,6 20 No. 872 3,6 17 10. példa Az alábbi összetételű táptalaj 20-20 ml-eit 500 ml-es rázólombikba mérjük és ott 5 percig 110 C°-on sterilizáljuk: glükóz 10% (NH4)2S04 4,5% kh2po4 0,1% MgS04 • 7H20 0,04% Fe++ 2 ppm Mn++ 2 ppm biotin 0,05 mg/liter tiamin hidroklorid 0,2 mg/liter szójabab fehérjehidrolizátum (7% nitrogéntartalommal) 1% CaC03 5% pH = 7,0 Brevibacterium lactofermentum AJ—3429 (FERM P-1857) törzzsel, melyet előzőié húsleves táptalajon tenyésztettünk, oltjuk be a fenti táptalajt, majd 31 C°-on, 72 órán át rázatjuk. A képződött L-lizin (hidroklorid formában) mennyiséé 5,1 g/dl (glükózra számítva 51% kitermelés). 11. példa Corynebacterium glutamicum AJ-3397 (FERM P-1613), AJ—3458 (FERM P-1982), AJ-3460 (FERM P—1984), AJ-3461 (FERM P—1985), Corynebacterium lilium AJ—3464 (FERM P-2026) és Corynebacterium acetoacidophilum AJ-3465 (FERM P-2027) törzseket tenyésztünk, ugyanazon eljárással, mint a 10. példában, kivéve az AJ-3460 fajtát, amelynek táptalajába még 0,5% élesztőkivonatot is adtunk. Az AJ-3465 törzset, amely AEC-rezisztens és alanin-igényes mutáns, a 3. kísérletben leírt mó-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
