172600. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vízoldható kivonatok előállítására Mycobacteriumokból és ezek immunológiai adjuvásként való alkalmazása

9

172600

10

A fenti módon előállított vízoldható C. anyag a következő jellemzőkkel rendelkezik: megjelenés: liofilizálás után fehér por, összetétel:

a) aminosav (mólarány): alanin (3), glutaminsav (2), alfa.alfa’-diaminopimelinsav (2),

b) aminocukrok (mólarány): N-acetil-glukózamin (2), N-glikolil-muraminsav (2),

c) redukáló nem-amino-cukrok: arabinóz, galaktóz, mannóz,

d) lipidek nincsenek jelen,

az aminosav-koncentráció 16 ± 3%, az aminocukor-koncentráció 16 ± 3%, a maradékot redukáló nem-amino-cukrok alkotják,

molekulasúly (a molekulánkénti 3 alanin-maradék alapján számítva): 6000 ± 500.

4. példa

Az 1. példában leírt módon járunk el, Mycobacterium tuberculosis var. hominis H37Ra, 5 Mycobacterium tuberculosis var. bovis Behring, Mycobacterium kansasii n°4 törzsekből - a két utóbbi törzs a párizsi Pasteur Intézetből szerezhető be — indulunk ki és vizes közegben homogenizálunk, centrifugálunk, sózunk, dializálunk és 10 kromatográfiás úton tisztítjuk.

A fenti Mycobacteriumokból kiindulva a kapott baktériumanyagot az 1. példában leírt módon zsírtalanítjuk, mégpedig A. Aebi és munkatársai által 1953-ban ismertetett módon. Az extrakció 15 hőmérsékletét és időtartamát a csatolt I. táblázat mutatja, ugyanez a táblázat tünteti fel a kapott kivonatok jellemzőit is.

I. Táblázat

a) Különböző Mycobacterium törzsek zsírmentesített sejtjeinek vízzel való extrahálásából származó S70 frakciók %-os hozama.

b) A frakciók Poli-PA hozama %-ban az S70 frakciók DEAE-cellulóz oszlopon való kromatografálása után

A Poli-PA DAP összetétele (%) Biogel P10-en való szűrés után, valamint a molekulasúly molekulánként 3,0 alanin-maradék alapra számítva

Az extrakció

Poli-PA DEAE-cellulóz

Poli-PA Biogel P10-en

Törzsek

hőmérséklete (C°) és időtartama (ó)

oszlopon való kromatografálás után

való szűrés után

C óra

S70 S70 zsírmente% % sített sejtek %

DAP DAP mólsúly % % ala = 3,0- ra von.

M. tuberculosis var. hominis

Peurois

20

5

0,9

45

0,4

0,52

2,3

15 500

H37Ra

20

6

Ml

majd

2,7

58

1,56

2,56

2,86

14 000

30

18

1,3 )

M. tuberculosis

var. bovis

Behring

40

18

2,63

38

1,0

0,42

2,42

14 300

M. kansasii n°4

40

24

4,25 ^

majd

} 7,0

30

2,1

1,45

2,40

13 800

40

24

2,75 J

5. példa táblázat szemlélteti. Ezeknek a kivonatoknak a

55 számított molekulasúlya 4000 ± 500.

A 2. példában leírt eljárásmódot ismételjük meg Mycobacterium tuberculosis var. hominis H37Ra, Test és Brevannes törzsből — a két utóbbi törzs a párizsi Pasteur Intézetből szerezhető be - származó baktériumanyagok felhasználásával a Peurois törzsből kapott baktériumanyag helyett. Más kiinduló anyagok még a Behring - beszerezhető a párizsi Pasteur Intézetből — és az M. phlei ATCC1175 törzsek útján kapott baktériumanyagok. A kapott vízoldható anyagok jellemzőit a II.

6. példa

A 3. példa szerinti műveleteket hajtjuk végre. A 60 fent említett Mycobacterium var. hominis H37Ra, M. kansasii n° 4 és M. phlei törzsből kiindulva kapott baktériumanyagokat használunk Mycobacterium tuberculosis var. hominis Test törzsből kiinduló anyag helyett. A kapott eredményeket a 65 III. táblázat mutatja.

5