172223. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy diszulfidhídon kívól legalább egy ciszteingyököt tartalmazó peptidek előállítására
5 172223 6 így tritil, az adott reakciókörülmények között lehasíthatók. Amino-védőcsoportokként például a következő csoportokat nevezzük meg: acil-csoportok, így formil-, trifluoracetil-, ftaloil-, p-toluolszulfonil-, benzilszulfonil-, benzolszulfenil-, o-nitrofenilszulfenil-csoportok, vagy mindenekelőtt szénsavból vagy tioszénsavból levezethető csoportok, így adott esetben az aromás gyökben halogénatomokkal, nitro-csoportokkal, rövidszénláncú-alkil- vagy rövidszénláncú-alkoxi- vagy rövidszénláncú-karbalkoxi-csoportokkal helyettesített benziloxikarbonil-csoportok, például benziloxikarbonil-, o-bróm-, p-bróm- vagy p-klór-benziloxikarbonil-, 2,4- -diklór-benziloxikarbonil-, p-nitro-benziloxikarbonil-, p-metoxi-benziloxikarbonil-csoportok, színes benziloxikarbonil-csoportok, így p-fenilazo-benziloxikarbonil- és p-(p'-metoxifenilazo)-benziloxikarbonil-, toliloxikarbonil-, (a,a-dimetil-3,5-dimetoxibenzil)-oxikarbonil-, benzhidriloxikarbonil-, 2-fenil-izopropiloxikarbonil-, 2- -tolilizopropiloxikarbonil-csoportok és mindenekelőtt a 2-(para-bifenilil)-2-propiloxikarbonil-csoport, továbbá alifás oxikarbonil-csoportok, így például az 1-metilciklobutiloxikarbonil-, izonikotiniloxikarbonil-, alliloxikarbonil-, ciklopentiloxikarbonil-, terc-amiloxikarbonil-, amadantiloxikarbonil-, izoborniloxikarbonil- és elsősorban a terc-butiloxikarbonil-csoport. Karboxil-csoportok például amid- vagy hidrazidképzés által vagy észterezés útján védhetők meg. Észterezéshez alkalmasak például rövidszénláncú adott esetben helyettesített alkanolok, így metanol, etanol, ciánmetilalkohol, benzoilmetilalkohol vagy különösen a terc-butanol, továbbá aralkanolok, így aril-rövidszénláncú-alkanolok, például adott esetben rövidszénláncú-alkilvagy rövidszénláncú-alkoxi-csoportokkal vagy halogénatomokkal helyettesített benzil- vagy benzhidrilalkoholok, így a p-nitrobenzilalkohol vagy a 2,4,6-trimetilbenzilalkohol, vagy fenolok és tiofenolok, így a fenol, tiofenol vagy a tiok rezol. A szerin-, treonin- és tirozingyökök például észterezéssel vagy éterezéssel védhetők. Az észterezésnél acilgyökként például rövidszénláncú-alkanoilgyökök, így acetil-gyök, aroilgyökök, így benzoil-gyök és mindenekelőtt a szénsavból leszármaztatható gyökök, így benziloxikarbonil-, o-bróm bçnziloxi karbonil- vagy etiloxikarbonil-gyökök alkalmasak.Éterezésrealkalmascsoportok például a benzil-, m-brómbenzil-, 2,6-diklórbenzil-, tetrahidropiranil- vagy a terc-butilgyökök megfelelőek. A hidroxil-csoportok megvédésére alkalmasak a Bér. 100, 3838—3849 old. (1967) folyóiratban leírt 2,2,2-trifluor-l-terc-butiloxikarbonilamino- vagy -1-benziloxikarbonilaminoetil-csoportok (Weygand). Elsősorban savasan lehasítható, például ecetsavval, trifiuorecetsavval, sósavval vagy fluorhidrogénsavval lehasítható védőcsoportokat, különösen terc-butil-típusú csoportokat, így a terc-butiloxikarbonil-csoportot, a terc-butilészter- és a terc-butiléter-csoportot, alkalmazzuk. Emellett számolnunk kell azzal a körülménnyel, hogy az aminosavak felépítésénél lánchosszabbítással az amino-csoport felőli végen a különböző láncoknak egymáshoz képest szelektív módon lehasítható védőcsoportokat kell hordaniok, ahogy ez a 2 346 147 számú NSZK-beli nyilvánosságrahozatali iratban és a 805 147 számú belga szabadalmi leírásban ismertetve van. Ahogy az ott leírtakból látható, állandóan meglevő csoportokként úgynevezett stabilis védőcsoportokra van szükség, például az oldalláncok amino-, hidroxil- és karboxilcsoportjainak, továbbá a végkarboxil-csoportnak a megvédésére, szükség van továbbá kétfajta úgynevezett labilis védőcsoportra a felépítésben levő különböző láncok a-amino-csoportjainak a megvédésére. Az eljárást a 2 346 147 számú NSZK-beli nyilvánosságrahozatali irat az emberi inzulin egy részén, mégpedig a 14—21 A-lánc +17—30 B-lánc példáján, amelyek e találmányi bejelentésben leírt eljárásnál is felhasználásra kerülnek az emberi inzulin előállításánál, mutatja be. Amino-védőcsoportokként ott mindkét lánc számára a 2-(p-bifenilil)-2-izopropiloxikarbonil-csoport és a tritil-csoport jön számításba. Az említett nyilvánosságrahozatali irat, illetve a 805 147 számú belga szabadalmi leírás tartalmát e találmányi bejelentés kiegészítésére tekintetbe kell venni. Amennyiben a találmány szerinti eljárásnál cisztintartalmú védett peptideket kapunk, ezeket hosszabb szénláncú peptidek szintéziséhez közvetlenül felhasználhatjuk vagy — kívánt esetben — a védőcsoportokat ismert módon lehasíthatjuk. A találmány szerinti eljárásnál alkalmazásra kerülő kiindulási anyagok, mégpedig a ciszteintartalmú aminosavak, amelyekben a ciszteingyök Rj vagy R2 merkapto-védőcsoportokkal védve van, ismertek vagy önmagában ismert módszerekkel, így például az 1 259 017 és az 1 329 860 számú nagy-britanniai szabadalmi leírásokban ismertetett módon, ahol ezeknek a védőcsoportoknak a lehasítása le van írva, előállíthatok. A ciszteintartalmú aminosavak egy vagy több -S-S-cisztinhidat is tartalmazhatnak, amelyeket a szintézis egy korábbi időpontjában alakítottunk ki. A ciszteintartalmú kiindulási anyagokat a cisztin tartalmú aminosavak segítségével előállítandó végtermékként, például inzulinként, is kaphatjuk, miközben a peptid felépítéséhez szükséges aminosavakat —CONH— kötések kialakítása közben tetszés szerinti időbeli sorrendben egymással kondenzáljuk, mimellett a reakcióban részt nem vevő funkciós csoportokat közben megvédjük és valamely tetszés szerinti időpontban a ciszteingyököket cisztingyökökké oxidáljuk. Az alkalmazandó védőcsoportokat már az előzőekben említettük. Az aminosav- és/vagy peptidegységek összekapcsolása például oly módon történik, hogy valamely védett a-amino-csoporttal és aktivált terminális karboxil-csoporttal rendelkező aminosavat vagy peptidet egy szabad a-amino-csoporttal és szabad vagy védett, például észterezett vagy amidált terminális karboxil-csoporttal rendelkező aminosavval vagy peptiddel reagáltatunk, de történhet úgy is, hogy valamely aktivált a-aminocsoporttal és védett terminális karboxil-csoporttal rendelkező aminosavat vagy peptidet egy szabad terminális karboxil-csoporttal és védett a-amino-csoporttal bíró aminosavval vagy peptiddel hozunk reakcióba. A karboxil-csoportot például valamely savaziddá, -anhidriddé, -imidazoliddá, -izoxazoliddá vagy egy aktivált észterré, így ciánmetilészterré, karboximetilészterré, p-nitrofeniltioészterré, p-nitrofenilészterré, 2,4,5-triklórfenilészterré, pentaklórfenilészterré, N-hidroxiszukcinimidésztené, N-hidroxiftálimidészterré, 8-hidroxikinolinészterré, N-hidroxipiperidinészterré alakíthatjuk, vagy egy karbodiimiddel (adott esetben egy N-hidroxiszukcinimid vagy valamely helyettesítetlen vagy például halogénatommal, metil- vagy metoxi-csoporttal helyettesített 1-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
