172216. lajstromszámú szabadalom • Eljárás klavulánsav és sói elkülönítésére
29 172216 30 mazó szénhordozós palládiumkatalizátort adunk, majd a reakcióelegyen szobahőmérsékleten és légköri nyomáson 25 percen át hidrogéngázt vezetünk keresztül. Ezután a katalizátort kiszűrjük, vízzel és etanollal mossuk, majd pedig az egyesített szűrleteket szobahőmérsékleten és csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott félig szilárd anyagot acetonnal eldörzsöljük, majd szűrjük és dietiléterrel mossuk, amikoris 135 mg klavulánsav-nátriumsót kapunk. A terméket infravörös spektruma alapján azonosítottuk. 26. példa Klavulánsav-nátriumsó baktériumelleni spektruma A klavulánsav-nátriumsó különböző baktériumokkal szemben mutatott baktéríumelleni hatását mikrotíter módszerrel vizsgáljuk. Mikrotiter műanyag tálakban a klavulánsav-nátriumsó Oxoid-féle érzékenységi tesztfolyadékkal készült hígításait beoltjuk minden egyes mikroorganizmus egy éjszakán át végzett tenyésztése útján kapott fermentlével úgy, hogy az inokulum végső hígítása 0,5 x 10 4 legyen. A mintákat ezután egy éjszakán át inkubáljuk, majd a következő reggel a tenyészet zavarosságának megfigyelése útján a bakteriális növekedés stádiumát megállapítjuk. A közelítő MIC-értékekben [MIC: minimális gátlási koncentráció; dimenziója fzg/ml] kifejezett eredményeket az alábbi III. táblázatban foglaljuk össze. A táblázatból látható, hogy a vizsgált vegyület hatásspektruma széles. III. táblázat Klavulánsav-nátriumsó baktériumelleni spektruma Baktériumtörzs MÏC-érték (ixg/ml) Staphylococcus aureus (Oxford H) 7,5 Staphylococcus aureus (Russell) 7,5 Bacillus subtilis 62 Streptococcus faecalis >500 Streptococcus pyogenes CN 10 125 Escherichia coli NCTC 10418 31 Klebsiella aerogenes 31—62 Klebsiella oxytocum 62 Enterobacter aerogenes T 624 31 Enterobacter cloacae 62 Acinetobacter anitratus 125 Providentia stuartii 125 Serratia marcescens 125 Proteus mirabilis C977 62 Proteus vulgaris W090 31 Salmonella typhimurium 31 Shigella sonnei 62 Pseudomonas aeruginosa A 500 27. példa A klavulánsav-nátriumsó [ï-laktamâzt inhibitáló aktivitása A klavulánsav progresszíve és irreverzíbilisen inhibitólja az Escherichia coli specieshez tartozó törzsek által termelt ß-laktamäzt. Az 1. kimutatási módszerrel elvégzett további vizsgálatok bizonyítják, hogy a klavulánsav inhibitálja az alábbi IV. táblázatban felsorolt mikroorganizmusok által termelt B-laktamázt is. IV. táblázat Klavulánsav p-laktamázt inhibitáló aktivitása A ß-laktamäzt termelő mikroorganizmus Közelítő 1R0 érték az Escherichia coli JT 4 esetét egynek véve Staphylococcus aureus (Russell) 1,0 Escherichia coli JT 4 1,0 Escherichia coli Bll 2,0 Klebsiella aerogenes A 0,6 Pseudomonas aeruginosa 1822 (R faktor) 5,0 Pseudomonas dalgleish 0,1 Szubsztrátumként penicillin G-t használva a klavulánsav-nátriumsó I50 értéke a Staphylococcus aureus (Russell) által termelt S-laktamázzal szemben közel 0,06 [Jig/ml. 28. példa Klavulánsav előállítása 100 mg klavulánsav-benzilészter 5 ml etanollal készült oldatához 30 mg 10% fémpalládiumot tartalmazó szénhordozós palládiumkatalizátort adunk, majd a reakcióelegyen szobahőmérsékleten és légköri nyomáson 45 percen át hidrogéngázt vezetünk keresztül. Ezután a katalizátort kiszűrjük, etanollal mossuk és a mosófolyadékot a szűrlethez hozzáadjuk. Az így kapott elegyet vákuumban bepároljuk, amikoris 58 mg mennyiségben nem stabil, viszkózus olaj formájában klavulánsavat kapunk. NMR spektrum (C5D5N-ben felvéve): 8 3,05 (d, 1, J= = 18 Hz), 3,60 (dd, 1, J,= 18 Hz), J2=2,5 Hz); 4,75 (d, 2, J=7,5 Hz), 5,58 (t, 1, J = 7,5 Hz), 5,66 (s, 1) és 6,0 (d, 1, J=2,5 Hz). 29. példa Klavulánsav-nátriumsó előállítása 840 mg klavulánsav-benzilészter 30 ml etanol és 5 ml víz elegyével készült oldatához 244 mg nátrium-hidrogén-karbonátot és 267 mg 10% fémpalládiumot tartalmazó szénhordozós fémkatalizátort adunk, majd a reakcióelegyen szobahőmérsékleten és légköri nyomáson 25 percen át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, vízzel és etanollal mossuk, majd a mosófolyadékot a szűrlethez hozzáadjuk. A kapott elegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot víz és aceton elegyéből kristályosítjuk, amikoris 565 mg mennyiségben mikrokristályokat kapunk. Víz és aceton elegyéből végzett átkristályosítás után tűkristályokat kapunk, amelyek foszfor-pentoxid felett 24 órán át végzett szárítás után az alábbi elemzési eredményeket adják : C%=41,01, 40,86; H% = 3,77, 3,64; N% = 5,68, 5,51. Ym£=1785, 1700 és 1620 cm"1. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 15
