171986. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sztreptokokkusz-anyagcseretermékek, különösen sztreptokináz, sztreptodornáz, sztreptolinizin 0 és hialuronátliáz kinyerésére

171986 padékot ezután 50 ml 22%-os telítettségű ammónium-szulfát-oldattal mossuk, majd eldobjuk. A centrifugálásnál kapott felülúszó fázist és a mosó oldatot összeöntjük, amikor is 175 ml oldatot kapunk. Ebből az oldatból pH 7,0 értéknél 45% 5 ammónium-szulfáttal végzett kicsapás útján a sztreptokináz a sztreptodornáz legnagyobb részétől elválasztható. Ezután azonos pH-értéken még további 77 ml telített ammónium-szulfát-oldatot adunk az oldathoz. A csapadékos elegyet 15 per- 10 cen át keverjük, majd 45 percen át ülepedni hagyjuk és a csapadékot centrifugálás útján elkülönítjük. A csapadékot ezután egyszer 50 ml 50%-os telítettségű ammónium-szulfát-oldattal mossuk, majd 20 ml vízben feloldjuk. Ezt az oldatot 15 ezután 0,02 mólos foszfátpufferrel (pH-ja 8,0) szemben dializáljuk, majd az 1. példában ismertetett módon előkészített oszlopra visszük fel. Az eluálást is az 1. példában ismertetett módon végezzük, így a sztreptokináz kiindulási mennyisé- 20 gének közel 50%-át kapjuk, a kapott sztreptokináz fajlagos aktivitása 60 000-80 000 E/mg. A kapott sztreptokináz abszolút mennyisége 10 500 000 egység. A sztreptokináz kicsapásánál kapott folyadékból a sztreptokináz. eltávolítása után (ez a fo- 25 lyadék a sztreptodornáz 60%-át tartalmazza) a sztreptodornáz könnyen elkülöníthető úgy, hogy 100 ml oldatra számítva 20 g szilárd ammónium-szulfátot (235 ml-hez 47 g) adagolunk, majd a kapott csapadékos elegyet 30 percen át keverjük, 30 60 percen át ülepedni hagyjuk és a csapadékot centrifugálás útján elkülönítjük. A csapadékot ezután 20 ml 0,02 mólos foszfátpufferben feloldjuk, a kapott oldatot azonos pufferral szemben dializáljuk és az 1. példában említett DEAE-agaróz-Q 35 oszlopra felvisszük. Ebben az esetben is lineáris gradienseluálást végzünk, 0,02 mólos foszfátpufferrel (pH-ja 8,0) és 0,02 mólos, 0,4 mól nátrium-kloridot tartalmazó foszfátpufferral (pH-ja 7,6). C Streptococcus-törzs alkalmazása esetében itt három 40 aktivitás csúcsot kapunk, amelyek mintegy 0,02 mól, 0,05 mól és 0,2 mól nátrium-klorid-koncentrációnál eluálódnak. Az utolsó csúcs tartalmazza az összes sztreptodornázaktivitás gyakorlatilag 90%-át, ezért csak ezt különítjük el, míg a 45 többi izoenzimet eldobjuk. így a hozam 20%, illetve az abszolút mennyiség 500 000 viszkozimetrikus egység. 8 Szabadalmi igénypontok: Eljárás sztreptokokkusz-anyagcseretermékek, különösen sztreptokináz, sztreptodornáz, sztreptolizin O és hialuronátliáz kinyerésére Streptococcus tenyészetekből, előnyösen a Streptococcus equisimilis IMET B 377 törzs fermentálása útján kapott tenyészetből azzal jellemezve, hogy a fermentált tenyészet pH-értékét 3,5-re állítjuk be majd 10 C° és 37 C°, előnyösen 10 C° és 20 C° közötti hőmérsékleten végzett keverés útján az anyagcseretermékeket az elölt sejteken adszorbeáltatjuk ezután a centrifugálás útján elkülönített sejtmasszát 8 pH-értéken 0,1 mólos foszfátpufferrel eluáljuk, és ezt követően a) sztreptolizin O, sztreptodornáz, sztreptokináz és hialuronátliáz kinyerése céljából az eluátumban ammónium-szulfát-oldattal kicsapást végezünk, a csapadékot 0,02 mólos foszfátpufferben újraoldjuk és az oldatot térhálósított dietilaminoetil-agarózból készült kromatográfiás oszlopra felvisszük, majd 8,0 pH-jú 0,02 mólos foszfátpufferrel és 7,6 pH-ju, foszfátra nézve 0,02 mólos és nátrium-kloridra nézve 0,4 mólos pufferrel gradiens eluálást végzünk, vagy b) hialuronátliáz kinyerése céljából az eluátumot közel azonos térfogatú 0,1 mólos foszfátpufferrel hígítjuk, a kapott elegyhez 6 és 7 közötti pH-értéken nagy diszperzitásfokú szilícium-dioxidot keverünk, és a szilícium-dioxidtól elválasztott oldatból a hialuronátliázt ammónium-szulfáttal kicsapjuk, centrifugálással elkülönítjük, vízben újraoldjuk, 0,02 mólos foszfátpufferrel szemben dializáljuk, és a dializátumot az a) változatban ismertetett módon kromatografáljuk, illetve sztreptokináz és sztreptodornáz kinyerése céljából az ezeket adszorbeálva tartalmazó szilícium-dioxidot 9,5 és 10,5 közötti, előnyösen 10,0 pH-értéken vízzel eluáljuk, majd az eluátumot egymás után 10%-os nátrium-klorid-oldattal, kalcium-foszfáttal és ammónium-szulfáttal kicsapásnak, végül pedig az a) változatban ismertetett kromatografálásnak vetjük alá, vagy c) sztreptokináz és sztreptodornáz kinyerésére az eluátumot egymás után 10%-os nátrium-klorid-oldattal és kalcium-foszfáttal kicsapásnak, ezután frakcionált ammónium-szulfátkicsapásnak és végül az a) változatban ismertetett kromatografálásnak vetjük alá. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 784631 - Zrínyi Nyomda 4