171962. lajstromszámú szabadalom • Eljárás laktát-dehidrogenáz izomerjeinek egyidejű vagy külön történő meghatározásáram és diagnosztikai eszköz a meghatározás elvégzésére
171962 Abban a speciális esetben, ha olyan hüvelyváladékot vizsgálunk, amelynek eredeti pH-értékét még nem változtattuk meg, akkor különösen alkalmas a trietanolamin-nátriumhidroxid puffer jelenlétében történő meghatározás, amelyhez a tesztkompozíció pH-értékét 7,0-ra állítjuk be, szemben a 6,3-6,4 pH-értékre beállított vizsgálandó minták esetével, amelyeknél a tesztkompozíció ugyanilyen pH-értékre van beállítva. így a találmány szerinti eljárás lehetővé teszi a hüvelyváladék vizsgálatát a hüvelyben, a női genitalis traktus alsó részében fellépő patológiás elváltozások megállapítására. E célból a találmány szerinti tesztkompozíciót alkamas hordozóanyagra, főleg tamponra, de például tesztcsíkokra visszük fel, 5 majd az így kapott diagnosztikai eszközt a hüvelybe juttatjuk, ahol a hüvelyben a hüvelyváladék LDH-izoenzimjeivel a reakció 6,0 és 6,5 közötti, különösen 6,3-6,4 pH-értéken végbemegy. 10 A találmány szerinti tesztkompozíció például az alábbi összetételű oldatból állhat: Előnyös Alsó és felső mennyiség koncentrációhatár trietanol-nátriumhidroxid puffer pH 7,0 nátriumlaktát (D,L-tejsav nátriumsója) fenazinmetoszulfát (PMS) nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD) nitrokék-tetrazóliumklorid (NBT) 1/ mM = millimól 5,0 mM11 1,0-150 mM 67,5 mM 20-350 mM 0,1 mM 0,01-1,0 mM 1,5 mM 0,1-10 mM 0,3 mM 0,01-1,5 mM 30 35 40 Ezt a tesztkompozíciót fénytől védve alkalmas hordozóanyagra, különösen tamponra visszük fel, és az így kapott találmány szerinti diagnosztikai eszközt felhasználásáig fénytől védve tároljuk. Az LDH jelenléte a hüvelyváladékban azáltal mutatkozik meg, hogy mintegy 5-10 perc után a tampon kék szint ölt. A következő reakciók mennek végbe: + LDH 1. laktat + NAD ^ piruvát + NADH + H* 2. NADH + fenazinmetoszulfát + ff+NAD* + redukált fenazinmetoszulfát 3. redukált fenazinmetoszulfát + nitrokék-tetrazóliumklorid -> formazán-fenazinmetoszulfát 45 Tekintettel arra, hogy a laktátkonverzió után végbemenő második és harmadik reakció is éppúgy a képződött redukált koenzimet „fogyasztja", mint az első reakció, vagyis a laktátkonverzió egyensúlya még jobban jobbra tolódik el, a 7,0 pH-értékre 50 pufferolt tesztkompozíció alkalmazása esetében a tampon felhelyezése után a tényleges reakció 6 körüli, különösen 6,3-6,4 pH-értéken megy végbe, így az izoenzimek, különösen az LDH—4 és LDH-5 (melyek a hüvelyváladék abnormális elvál- 55 tozásai esetében a hüvelyváladékban megjelennek) optimálisan kimutathatók. A hüvelyben felhasználásra kerülő tesztkompozíciókhoz olyan puffert szükséges alkalmazni, amely stabil és a testszövetekkel összeférhető. E 60 célra különösen alkalmas a trietanolamin-nátriumhidroxid puffer. A találmány szerinti tesztkompozíció az alkalmazandó hordozóanyagra, különösen tamponra bármilyen módon felvihető. Ismeretes, hogy az ilyen 65 tesztkompozíciók kezelését fénytől elzárva kell végezni és a tesztkompozícióval ellátott hordozóanyagot is fénytől gondosan védett helyen kell tárolni felhasználásáig. A tesztkompozíciónak a tamponba való felvitelére két előnyös módszert említhetünk, éspedig az előnyös összetételű tesztkompozícióból közel 2 ml injektálását a tamponba vagy pedig a tampon egyik végének mintegy 0,75 cm hosszban való impregnálását ugyancsak közel 2 ml térfogatú tesztkompozícióval. Az így kezelt tampont ezután szárítjuk, célszerűen fagyasztásos szárítással. A tesztkompozíció azonban felvihető például egy kihúzófonálra is, amely később szükség esetén a tampontól könnyen elválasztható. Igen előnyös a tesztkompozíció felvitele sáv- vagy zsinórformájú gyapotanyagra, amely a tamponba behelyezhető. Tekintettel arra, hogy a női genitalis traktus alsó részében bekövetkezhető patológiás elváltozás meghatározásához a tamponnak a hüvelybe juttatása során természetesen nem ismeretes, hogy mennyi hüvelyváladék van jelen a hüvelyben, továbbá esetről esetre a hüvelyváladék mennyisége és pH-ja ingadozik, célszerű, ha a tesztkompozíciónak olyan nagy a pufferkapacitása, hogy a meghatározás, illetve kimutatás helyén 6 és 6,5, előnyösen 6,3-6,4 pH-érték biztosítható legyen. Minthogy a gyakorlatban megállapítottuk, hogy a kihúzófonalban levő tesztkompozíció pufferkapacitása néha e célra nem elég nagy, célszerű ebben az esetben a tamponba nagyobb mennyiségű pufferanyagot bevinni, miáltal a kihúzózsinórnak legalább a tamponhoz legközelebb eső részén kielégítő a pufferhatás. A találmány szerinti tesztkompozícióval ellátott hordozóanyagokat nem szükséges orvosnak alkalmaznia, hanem bármely nő képes az alkalmazást 3
