171790. lajstromszámú szabadalom • Eljárás teikomicint tartalmazó antibiotikum-elegy és egyes faktorainak előállítására
171790 képződött csapadék szűréssel elkülöníthető. A szűrletet nagymennyiségű petroléterbe öntjük és a kapott nyers csapadékot szűréssel kinyerjük. A micéliumtömeget 3,5 pH-értékű vízzel mossuk, vákuumban szárítjuk és 2: 8 arányú víz: aceton keverékkel extraháljuk. Az acetonos extraktumot vákuumban 40—45 °C hőmérsékleten koncentráljuk. A vizes maradékot pH — 3,5 értékre állítjuk be és butanollal háromszor extraháljuk. Az összegyűjtött butanolos extraktumokat kismennyiségű pH = 3,5 értékű vízzel mossuk és vákuumban eredeti térfogatának 1 / 20 részére koncentráljuk. A koncentrált oldatot 4 °C hőmérsékleten 10—12 óra hosszat állni hagyjuk. Ezt követően nyers csapadékot kapunk, amelyet szűréssel különítünk el. A szűrt oldatot nagymennyiségű petroléterbe öntve újabb csapadékot kapunk. 10 15 puffer — n-butanol — hexán 1:1: 0,05 arányú keveréket használunk. A teikomicin Ah A 2 és A 3 szétválasztását oszlopkromatográfiával Sephadex LH—20-on végezzük, n-propanol-etilacetát — 0,2 n NH4OH 10: 7 : 7 arányú keverékét használva eluensként. Az elvált frakciókat szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiával analizáljuk, 2:1:2 arányú n-propanol-etilacetát-koncentrált NH4 OH oldószerrendszert és mikrobiológiai kiértékeléshez S. aureus-t használva. A teikomicin A1 Rf értéke = 0,48, a teikomicin A ; Rf-értéke = 0,10, és a teikomicin A3 Rf értéke = 0,0. Az egyes antibiotikumokat tartalmazó frakciókat kis térfogatra koncentráljuk, metanollal hígítjuk és nagymennyiségű acetonba öntjük, amelyben a három antibiotikum fehér amorf por alakjában kiválik. A IV. táblázatban összefoglaltak szerint végrehajtott kromatográfiás vizsgálatok azt mutatják, hogy a koncentrált butanolos extraktumok hűtésével kapott termékek tartalmazzák lényegében a teikomicin Ah A 2 és A3 faktorokat. Az A 2 faktor van jelen nagyobb mennyiségben —, az inert nem-poláros oldószerben végzett (petroléter) kicsapással kapott termékek pedig a 8327 B és C faktorokat tartalmazzák. A 8327 B és C faktorok ellenáramú megoszlatással szétválaszthatok és mint egyedi antibiotikus anyagok izolálhatok. A szétválasztáshoz pH 7,0 M/15 m foszfát-A IV. táblázatban az öt antibiotikum különböző kromatográfiás értékeit láthatjuk, a különféle eluáló 20 rendszerekben. Az előzőekben leírt eljárás során összesen 10 g antibiotikumot kapunk, a következő megoszlásban: 25 teikomicin A1 lg teikomicin A2 3,5 g teikomicin A3 0,5 g 8327 B faktor 2,5 g 8327 C faktor 2,5 g IV. táblázat A 8327 B faktor, C faktor, teikomicin A1; teikomicin A 2 és teikomicin A 3 kromatográfiás értékei Kromatográfia l.szám Whatman-papíron A foltokat Staphylococcus aureus-szon végzett B c Teikomicin Teikomicin Teikomicin mikrobiológiai előhívással tesszük láthatóvá faktor faktor Aj A2 A 3 Eluáló rendszer 1. 1/15 m pH =6,0 foszfát pufferrel telített butanol 0,85 0,86 0,0 0,0 0,0 2. 2% p-toluolszulfonsavat tartalmazó vízzel telített butanol 0,83 0,88 0,05 0,13 0,0 3. 2% ammóniumhidroxidot tartalmazó vízzel telített butanol 0,73 0,79 0,0 0,0 0,33 4. butanollal telített 1/15 m pH =6 foszfát puffer 0,0 0,76 0,20 0,25 0,65 5. NH4 C1 20%-os vizes oldata 0,0 0,0 0,0 0,61 6. Butanol : metanol : víz (40 : 10 : 20) 0,75% metilnaranccsal 0,88 0,88 0,42 0,37 0,13 7. Butanol : metanol : víz (40 : 10 : 20) 0,89 0,90 0,46 0,41 0,20 8. Etilacetát vízzel telítve 0,20 0,70 0,0 0,0 0,0 9. n-propanol : n-butanol : 10 n NH4 OH (2:3:4) Vékonyrétegkromatográfia szilikagélen Eluáló rendszer n-propanol : etilacetát : konc. NH4 OH (2:1:2) 0,88 0,55 0,48 0,43 0,10 0,10 0,0 4
