171517. lajstromszámú szabadalom • Eljárás acne vulgaris kezelésére használható, orálisan adagolható készítmény előállítására

171517 8 Ezek butanol-jégecet elegybe rázhatok át, és töményíthetők, illetve iiofilizálva koncentrálhatok. Intrakutan adagolva magas koncentrációban (37/ml) gyulladáskeltő ingert okoznak. Ebben a koncentrációban csökkentik az erythrocyták negatív felületi feszültségét és azok felületére adszorbeálódnak, ennek következtében specifikus immunszérumokkal, melyek az erythrocyták agglutinációját idézik elő, már kis koncentrációban is kimutathatók. A találmány szerinti eljárás kínálta lehetőség, hogy egyidőben immunhatást és deszenzibilizáló hatást érjünk el, kivételes eset. A találmány szerinti eljárással előállított készítmény immunadjuvánsként előnyösen karbamidot tartalmaz, továbbá felületaktív biogén aminokat és táptalaj összetevőként használt peptont is adunk hozzá. A pepton, mint ahogy erről az előzőekben már szó volt, a fagyasztva szárítás segédanyagaként is szerepet játszik. Ha a pepton előkezeléseié Corynebacterium acnes Gerrath-ot használunk, úgy toxikus kísérőanyagok nem keletkeznek. Az a tény, hogy a karbamid az acne-antigének orális adagolásakor immunadjuvánsként hat, ezideig nem volt ismeretes. A találmány szerinti eljárást az acne vulgaris gyógyítására használható készítmény előállítására és adagolására a következőkben példákkal szemléltetjük. 1. példa Az acne-tenyészet előállítása a) 2300 ml húskivonat-peptonból (pH 7,1) és 600 ml Sörensen-pufferból (pH 7,1) táptalajt készítünk, amit 120 C° hőmérsékleten egy órán át autoklávban sterilezünk. Ezután 60 ml glicerint adunk a táptalajhoz és Erlenmeyer-lombikokba 300-300 ml-t öntünk úgy, hogy a folyadék a lombik szűk nyaki részéig érjen. (A glicerin meggátolja más, nem kívánt baktériumok szaporodását, fagyasztva szárítás előtt dialízissel távolítjuk el.) A táptalajt ezután a Merck-cég által forgalmazott, analitikailag legtisztább minőségű paraffinnel felülrétegezzük és 60 percen át 100 C° hőmérsékleten (gőz) tartjuk a lombikokat. A lombikok légmentes zárását a táptalaj lehűtése előtt, előzőleg forró méhviasz-kemény paraffin elegyében áztatott gézdugókkal foganatosítjuk. A 35 C° hőmérsékletre lehűlt táptalaj adszorbeált savanyú vegyületektől gyakorlatilag mentes. A táptalajokat ezután a folyékony paraffin-rétegen keresztül, Pasteur-pipettával beoltjuk Corynebacterium acnes-szel. b) Oltás Corynebacterium acnes-szel Tárolt tenyészetről (2% glicerint tartalmazó, levegőmentes körülmények között Fortner szerint tenyésztett kultúra, lapos, 10 mm magas Fortner-csészében) húskivonat-pepton táptalajt oltunk, majd ezzel inokuláljuk a lombikokban sterilezett táptalajt. c) Tenyésztés, a baktériumok elkülönítése A tenyészeteket 10 napon át 30-32 C° hőmérsékleten inkubáljuk. A sterilitás ellenőrzésére kont-5 roll-tenyészeteket oltunk. 10 nap múlva 1 :10 arányban 5^os fenololdatot adunk a tenyészetekhez (a táptalaj fenoltartalma így 0,5%-os). 24 órán át állni hagyjuk, majd 2 órán át 60 C° hőmérsékleten tartjuk a tenyészeteket. Hűtés után a bak-10 térium-csoportok egyenletes eloszlatására 30 mp-en át ultrahanggal kezeljük a tenyészetet (500 W teljesítményfelvétel). A készítmény baktériumtartalmának meghatározására számlálókamrában megszámoljuk a tenyészetben levő sejteket. Annak bi-15 zonyítására, hogy a tenyészet elő sejteket nem tartalmaz, kontroll inokulumokat oltunk. Ha ezek a tenyészetek 10 nap múlva még sterilek, úgy 20 percen át 3500-as percenkénti fordulatszámmal (kb. 8000 g) centrifugálva elkülönítjük a bakté-20 riumokat. A Corynebacterium acnes sejtekből álló üledéket a sejtszámtól függően a felülúszóban szuszpendáliuk (1/20—1/10). Ez a még jelenlevő peptonnal együtt a fagyasztva szárítás segédanyagául használ-25 ható, nyomnyi mennyiségű, zavart nem okozó glicerin mellett még felületaktív anyagokat és kismolekulasúlyú, dializálható aminokat tartalmaz. A szuszpenziót ezután fagyasztva szárítjuk. Legalább 30 ml felülúszót (az üledék 1/10 része) 30 mindegyik tenyészetből elkülönítünk és 3 tengerimalacnak intraperitoniálisan beadjuk (az anaerob bacillusok okozta fertőzés és esetleges toxinok jelenlétének kizárása). Ugyanezen mennyiséget adjuk a tengerimalacoknak gasztrálisan adagolva is. Meg-35 figyelési idő 18 nap. d) A deszenzibilizáló hatású frakció A Corynebacterium acnes ATCC 27616 40 (Gerrath)- vagy ATCC 27615 (Beck)-törzsének tenyészetéből elkülönített felülúszót steril dializáló zacskókba töltjük és frissen leolvasztott hűtőszekrényben dializáljuk. A membránon keresztül zajló, hidegen bekövetkező párolgás következtében 1 hét 45 alatt az oldat térfogata eredeti térfogatának 1/4 részére csökken. Az így kapott fehéres színű, laza, higroszkópikus porhoz fagyasztva szárított Corynebacterium acnes Beck-, Gerrath- és ATCC 27617 (Vogel)-törzseket adunk. A készítményt azonos 50 mennyiségű karbamiddal egészítjük ki. A tablettákat úgy készítjük, hogy azok egyenként legalább egymilliárd baktériumot tartalmazzanak. A Beck-, Gerrath- és Vogel-törzseket úgy adagoljuk, hogy az első kettő szárazsúlyban mért összmennyisége leg-55 alább kétszerese legyen a Vogel-törzs mennyiségének (például IB : IG : IV, közönséges körülmények között 2B:2A:1V). 2. példa 60 A tabletták előállítása A tabletták szárazanyaga Corynebacterium aenesekből, mindhárom törzs kismennyiségben je-65 lenlevő tenyészlevéből, utólag hozzáadott, dializáit 4