171383. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunogén anyagok elkülönítésére Pasteurella Haemolytica vagy Pasteurella multocida törzsekből és ezeket tartalmazó vakcina előállítására

21 171383 22 A kimutatott áldozok Rf-értékük alapján hexózok. Valamennyi immunogén anyag kromatogramjának kezdetén oligoszacharidok mutathatók ki. 5. Ultracentrifugálás 5 Az Al, Bl, D és El jelű anyagok mintáit desztillált vízben oldjuk, és az oldatot ultracentrifugálásnak vetjük alá. Az adatokból kiszámítjuk az S-értéket [H. K. Schachman: „Ultracentrifuga- 10 tion in Biochemistry", Academic Press, London, New York (1959)]. Az immunogén anyagok a Djelű anyag kivételével homogénnek bizonyultak, az utóbbi anyagnál két csúcs jelent meg. Az S-értékek a következők: 15 Immunogén anyag: Al Bl D El S-érték: 2,52 3,19 1,69 10,6 3,18 12. példa Immunogén anyag elkülönítése Al és A2 típusú tokos P. Haemolytica sejtekből 25 Al-, illetve A2 típusú, tokos Pasteurella haemolytica sejteket (a Wellcome Research Laboratories intézetben WCC-5492, illetve WCC-5493 számon letétbe helyezett mikroorganizmusok) a 7. példában ismertetett módon tenyésztünk, azzal a 30 különbséggel, hogy az első centrifugálási lépés után a felső folyadékfázishoz 42 térf.% 'helyett 65 térf.% eléréséig adunk metanolt, a második centrifugálási lépés után kapott felső folyadékfázishoz pedig 48 térf.% i metanol helyett 1,5 térfogatrész acetont 35 adunk, A feldolgozási művelet során A1H-, illetve A2H-típusú immunogén anyagot kapunk. Szabadalmi igénypontok: 40 1. Eljárás Pasteurella multocida vagy Pasteurella haemolytica fertőzés által okozott pasteurellózissal szemben emlősökön és szárnyasokon immunitást kiváltó, az immunitást kiváltó dózisban emlősök és 45 szárnyasok számára nem toxikus, 100C°-os vízben 10 percig kezelve antigén sajátságait megtartó, nem dializáiható, vízben oldódó immunogén anyagok, előnyösen az Al, Bl, B2, D, El és E2 jelű immunogén anyagok előállítására, amelyek összes 50 aminosav-tartalma 200 és 800/zg/mg közötti érték és összes szénhidrát-tartalma 8% és 50% közötti érték, és az Al, D, Bl, El, B2 és E2 jelű anyagok infravörös abszorpciós spektruma rendre az 1., 2., 3., 4., 5., illetve 6. ábrán feltüntetettnek felel meg, 55 tokos Pasteurella multocida vagy Pasteurella haemolytica sejtek vizes szuszpenzió formájában rendelkezésre álló tenyészetéből, a feloldott sejtekből vagy a tenyésztési közegből, azzal jellemezve, hogy az endotoxint kémiai úton 6° kicsapjuk, a kapott, endotoxin-mentes folyadékfázisból szilárd formában vagy oldat formájában kinyerjük az immunogén anyagot, és kívánt esetben a kapott immunogén anyagot tisztítjuk. (Elsőbbsége: 1972. március 29). 65 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítása módja, azzal jellemezve, hogy az endotoxin kémiai kicsapása során a vizes szuszpenzió formájában rendelkezésre álló tenyészethez, az oldott sejtekhez vagy a tenyésztési közeghez valamely hidrofil oldószert adunk, célszerűen 30-80 térf.% i mennyiségben, a kivált endotoxint eltávolítjuk, és az endotoxin-mentes folyadékfázisból további hidrofil oldószerrel kicsapjuk az immunogén anyagot. (Elsőbbsége: 1972. március 29.) 3. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy hidrofil oldószerként egy rövidszénláncú alkanolt használunk. (Elsőbbsége: 1972. március 29.) 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy rövidszénláncú alkanolként egy primer alkanolt, előnyösen metanolt vagy etanolt használunk. (Elsőbbsége: 1972. március 29.) 5. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy hidrofil oldószerként egy rövidszénláncú alkil-ketont, előnyösen acetont vagy metil-etil-ketont használunk. (Elsőbbsége: 1972. március 29.) 6. A 2, igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja immunogén anyagok elkülönítésére a Carter-rendszer szerint az E vagy B típusba tartozó tokos Pasteurella multocida sejtek vizes szuszpenzió formájában rendelkezésre álló tenyészetéből, a feloldott sejtekből vagy a tenyésztési közegből, azzal jellemezve, hogy az endotoxin kémiai kicsapása során a tenyészethez, az oldott sejtekhez vagy a tenyésztési közeghez 50-80 térfogat% metanolt adunk, a kivált endotoxint eltávolítjuk, és az endotoxin-mentes folyadékfázisból 70-80 térfogat% metanol hozzáadásával kicsapjuk az immunogén anyagot. (Elsőbbsége: 1973. március 29.) 7. Az 5. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja immunogén anyagok elkülönítésére a Carter-rendszer szerint az E vagy B típusba tartozó tokos Pasteurella multocida sejtek vizes szuszpenzió formájában rendelkezésre álló tenyészetéből, a feloldott sejtekből vagy a tenyésztési közegből, azzal jellemezve, hogy az endotoxin eltávolítása után az immunogén anyagot 50-80 térfogat% aceton hozzáadásával csapjuk ki. (Elsőbbsége: 1972. március 29.) 8. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja immunogén anyagok elkülönítésére a Carter-rendszer szerint az E vagy B típusba tartozó tokos Pasteurella multocida sejtek vizes szuszpenzió formájában rendelkezésre álló tenyészetéből, a feloldott sejtekből vagy a tenyésztési közegből, azzal jellemezve, hogy az endotoxin kémiai kicsapása során a tenyészethez, az oldott sejtekhez vagy a tenyésztési közeghez 50-80 térfogat% metanolt adunk, a kivált endotoxint eltávolítjuk, és az endotoxin-mentes folyadékfázisból 50—80 térfogat% aceton hozzáadásával kicsapjuk az immunogén anyagot. (Elsőbbsége: 1973. március 29.) 11