171339. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12-vitamin tartalmú fermentlevek feltárására és sejtmentesítésére
15 171339 16 11. példa 50 literes keverővel ellátott, gőzzel fűthető, vasból készült tankreaktorba 20 1 — az 1. példa szerinti — 10 500 gamma/l B^-vitamint tartalmazó fermentlevet mérünk be, keverés közben a fermentlé pH-értékét 20%-os kalciumhidroxid vizes oldatával 9 ± 0,2-re állítjuk be, majd 45 ml 10% acetonciánhidrint tartalmazó acetont adunk hozzá. A rendszert ezután 70 C°-ra melegítjük és fél órán át ezen a hőmérsékleten tartjuk. A feltárást követően 5—5 részletben először 200 ml 30%-os vas(III)-klorid oldatot (70 g FeCl3 .6H 2 0), majd 5 perc múlva 140 ml 20%-os kalciumhidroxid oldatot adunk hozzá. A vas(III)-klorid oldat adagolása közben ügyelünk arra, hogy a pH-érték 5 alá ne süllyedjen, illetőleg a lúgosításnál 8,2 fölé ne emelkedjék. 10 perc utóreakciót tartunk, majd a keletkezett csapadékot Büchner-tölcséren szűrjük, leszívatjuk, majd kevés vízzel mossuk. A szüredék B]2 -vitamin-tartalma 10 320 gamma/l. Kitermelés: 98,3%. 12. példa Ali. példa szerint járunk el azzal a változtatással, hogy 25 100 gamma/l B12 -vitamin tartalmú, az 1. példában megadott fermentléből indulunk ki és a magasabb Bi2 -vitamin értéknek megfelelően 90 ml 10% acetonciánhidrin acetonos oldatát, illetőleg 2000 ml 30%-os vas(III)-klorid oldatot adunk hozzá. Mind a feltárásnál, mind a vas(III)-klorid oldattal történő kezelésnél a 7. példában leírt pH-értéken, illetőleg hőmérsékleten dolgozunk. A szüredék B12 -vitamin-tartalma 24 300 gamma/l. Kitermelés: 97,0%. 13. példa Keverővel ellátott üvegkörtéből, fogaskerékszivattyú segítségével, termosztátba merített rozsdamentes acélspirál-előmelegitőn keresztül egy 10 1 térfogatú tárcsás reaktor alsó részébe 44,4 l/óra sebességgel 21 300 gamma/l B12 -vitamin-tartalmú fermentlevet táplálunk. A fermentléhez, az előmelegítőbe lépése előtt, dugattyús szivattyúval 400 ml/óra sebességgel 1,25% nátriumcianidot és 15% nátriumhidroxidot tartalmazó vizes oldatot adagolunk. A tárcsás reaktorban levő fermentlé hőmérséklete 73 C°, pH-értéke 9 ±0,2. Mivel a tárcsás reaktor térfogata 10 1, a fermentlé átlagos tartózkodási ideje, azaz a feltárás 15 perc. A tárcsás reaktor felső részén kilépő fermentlé egy másik, 2 1 térfogatú tárcsás reaktor alsó részébe áramlik. A második reaktorba való belépése előtt a feltárt fermentléhez, 4,4 l/óra sebességgel, perisztaltikus szivattyúval folyamatosan 30%-os vas(III)-klorid (FeCl3 . 6H2 0) oldatot adagolunk. A vas(III)-klorid hatására a feltárt fermentleben levő baktériumfehérjék részleges koagulálódása következik be. A vas(HI)-klorídot tartalmazó feltárt fermentlé 4 1 térfogatú, üstalakú, az edény belső profiljának megfelelő alakú keverővel ellátott, csapadékképző edénybe folyik, melybe egyidejűleg dugattyús szivattyú segítségével a 8,0 ±0,2 pH-érték beállítására kb. 2,5 l/óra sebességgel 20%-os nátriumhidroxidot adagolunk és a pH-értékét indikátorpapírral ellenőrizzük. A vas(IIl)-hidroxidos szuszpenzió túlfolyón keresztül hűtőbe, majd innen szedőtartályba, vagy közvetlenül vákuumdobszűrőre kerül. A feltárt 5 és sejtmentesített fermentlé B12 -vitamin tartalma 21 020 gamma B12 -vitamin/l. Kitermelés: 98,7%. 10 14. példa Mindenben a 13. példa szerint járunk el, azzal a változtatással, hogy az 1. példában megadott fermentléhez nátriumcianid helyett az első melegítőbe lépése előtt 15 400 ml/óra sebességgel 2,2% acetonciánhidrint és 15% nátriumhidroxidot tartalmazó vizes oldatot adagolunk. A feltárt és sejtmentesített fermentlé B12 -vitamintartalma 20 340 gamma Bi2 -vitamin/l. Kitermelés: 95,5%. 15. példa Mindenben a 3. példa szerinti módon járunk el, azzal 25 a változtatással, hogy a vas(III)-klorid-oldat beadagolása után az elegyhez 7,0—7,5 pH-érték eléréséig 20%-os kalciumhidroxid szuszpenziót adunk (körülbelül 65 ml), majd az elegy pH-értékét 20%-os nátriumhidroxid-oldattal 8 ± 0,2-re állítjuk be. 30 Kitermelés: 96,5%. 16. példa 35 Mindenben a 4. példa szerinti módon járunk el. azzal a változtatással, hogy a vas(III)-klorid-oldat beadagolása után az elegy pH-értékét 20%-os kalciumhidroxid szuszpenziójával 7,0—7,5-re, majd 20%-os nátriumhidroxid-oldattal 8 ± 0,2-re állítjuk be. 40 Kitermelés: 98,2%. 17. példa 45 Mindenben a 13. példa szerinti módon járunk el, azzal a változtatással, hogy a vas(IIl)-kloridot tartalmazó fermentlé pH-értékét 20%-os kalciumhidroxid szuszpenzió és 20%-os nátriumhidroxid-oldat szivattyúk segítségével egyidejűleg végzett beadagolásával állítjuk 50 be 8,0 ±0,2 értékre oly módon, hogy két csapadékképző edényt alkalmazunk, és az elsőbe kalciumhidroxid szuszpenziót (pH = 7,0—7,5), a másodikba nátriumhidroxid-oldatot (pH = 8,0 ± 0,2) adagolunk. Kitermelés: 96,3%. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás Bi2 -vitamint és a fermentáció során képző-60 dött egyéb korrinvázas vegyületeket tartalmazó, adott esetben dúsított fermentlevek feltárására és sejtmentesítésére cianidionok és vas(III)-klorid jelenlétében, azzal jellemezve, hogy az adott esetben dúsított fermentlevet 60—90 C°-on cianidionokkal és/vagy valamely cián-65 hidrinnel, előnyösen acetonciánhidrinnel 7,5—9,5, elő-8
