171233. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikus hatású figaroesav komplex előállítására

13 171233 14 4. példa bepároljuk. 80 liter Skellysolve B (60—68 °C, forráspontú petroléter frakció, amely túlnyomórészt n-hexán-A táptalaj és a micélium extrahálása n-butanollal ból áll) hozzáadásával 728 g bíborszínű nyers figaroegyengén lúgos pH-értékű táptalaj esetén sav-komplexet kapunk. 5 A rázólombikban levő táptalajt leszűrjük, 5 liter összmennyiségű induló közeget használva 2,5 liter, 8. példa 8,5 pH-értékű szűrletet kapunk. Ennek 1,5 literes részletét 2X1 liter n-butanollal extraháljuk, a fázisokat el- A teljes fermentlé savas extrahálása metil-izobutilválasztjuk, és az egyesített szerves fázisokat betörné- 10 -ketonnal nyitjuk. A koncentrátumot éterrel hígítva 1,4 g bíborszínű, amorf, szilárd anyagot kapunk, amely egérnek 10 liter fagyasztott állapotban tárolt teljes fermentnapi 2 mg/kg mennyiségben adva hatásos az L—1210 levet felengedtetünk, és a pH 4,5-re való beállítása után leukémia ellen. A táptalaj szűrésekor elválasztott mi- 20 percen át keverjük 10 liter metil-izobutil-ketonnal. céliumot 30 percen át keverjük annyi metanollal, hogy 15 Ezután az elegybe szűrési segédanyagot keverünk, folyékony iszapszerű anyagot kapjunk; ezt szűrjük. majd ez utóbbit szűrési segédanyagból készített rétegen A szűrlet betöményítésével az alkohol legnagyobb ré- kiszűrjük. A szűrlet fázisait elválasztjuk, és a szerves szét eltávolítjuk és a vizes maradékot a fenti módon fázist kis térfogatra betöményítjük. Ezt feleslegben levő extraháljuk, így 6,35 g figaroesav-komplexet kapunk. Skellysolve B-vel felhígítva 4 g narancsvörös színű figa-Azt találtuk, hogy a termék, amely bíborszínű, amorf 20 roesav-komplexet kapunk szabad sav alakjában, amely szilárd anyag, egérnek napi 8 mg/kg mennyiségben 6,2 [xg/ml hígításban bakteriofág indukáló hatást muadva hatásos az L—1210 leukémiával szemben. tat. 5. példa 25 9. példa A teljes fermentlé extrahálása n-butanollal a fermentlé pH-értékén 7. példa A gyengén lúgos teljes fermentlé ipari méretű extrahálása n-butanollal 2788 liter, 8,6 pH-értékű teljes fermentlevet 1357 liter n-butanollal keverünk. A szerves fázist elválasztjuk, így 783 liter extraktumot kapunk, ezt 13 liter térfogatra A teljes fermentlé ipari méretű savas extrahálása metil-izobutil-ketonnal 10. példa A figaroesav-komplex só szabad savvá történő átalakítása A 7. példa szerinti módon lúgos, n-butanolos extrakcióval kapott bíborszínű, nyers szilárd anyagot (25 g) 25 °C-on 1 liter vízzel keverjük addig, amíg fel nem oldódik. A bíborszínű oldat pH-ját koncentrált sósav ke-35 40 45 50 55 60 1,5 liter térfogatú, 8,6 pH-értékű teljes fermentlevet körülbelül egyenlő térfogatú n-butanollal keverünk. A sűrű masszát diatómaföldön át (Celite, gyártja a Johns-Manville Products Co.) szűrjük, a fázisokat elválasztjuk, és a szerves fázist kis térfogatra bepároljuk. Ezt feleslegben alkalmazott éterrel felhígítjuk, hogy kicsapjuk a figaroesav-komplexet. így 621 mg komplexet kapunk bíborszínű, amorf szilárd anyag alakjában, amely egérnek napi 0,2 mg/kg mennyiségben adva hatásos az L—1210 leukémiával szemben. A szilárd anyag nem olvad meg, hanem 200 °C felett elbomlik. 6. példa A teljes fermentlé extrahálása n-butanollal savas pH-értéken Az 5. példa szerinti módon járunk el, azonban a teljes fermentlé pH-ját sósavval 4,0-ra állítjuk be és az extrakció folyamán ezen az értéken tartjuk. 4 liter teljes fermentléből 1,7 g figaroesav-komplexet kapunk szabad sav alakjában mint narancsvörös szilárd anyagot. Az anyag egéren 0,25 mg/kg/nap koncentrációban mérgező, és bakteriofág indukáló tulajdonságokat mutat egéren 1,5 u.g/ml-ig hígítva. 30 3095 liter teljes fermentlé pH-ját 10 °C-on 8,35-ről 49 liter 30%-os kénsav-oldat keverés és hűtés közben történő hozzáadásával 3,35-re állítjuk be. Körülbelül kétszeres térfogatmennyiségű (6412 liter) metil-izobutil-ketont keverünk hozzá, majd feleslegben levő szű-35 rési segédanyagot (diatómaföld) adagolunk. Az elegyet előzőleg bevont vákuumszűrőn szűrjük, a szűrőpogáv csa leöblítéséhez további 2554 liter metil-izobutil-ketont használunk. A termékben gazdag, 7555 liter térfogatú metil-izobutil-ketonos extraktumot elválaszt-40 juk, és 10 literre bepároljuk. A bepárlás folyamán 1285 kg nedves szilárd anyag válik le, ezt összegyűjtjük. A koncentrátumhoz 100 liter Skellysolve B-t adunk, ekkor további 365 g nyers olajszerű anyagot kapunk. Az először kapott szilárd anyagot megszárítjuk, így 45 858 g terméket kapunk, ezt három részre osztjuk. Ezek mindegyikét 4—4 liter acetonnal összekeverjük, és az oldhatatlan anyagot leszűrjük. Ez az utóbbi jó szűrési segédanyagnak bizonyult, összegyűjtve és megszárítva súlya 367 g. Az acetonos oldatot betöményítjük, és fe-50 leslegben levő éterrel felhígítjuk, így 294,5 g nyers figaroesav-komplexet kapunk. Az éter lepárlásával 19,2 g hatástalan anyagot kapunk. A Skellysolve B-vel végzett lecsapással kapott olajszerű anyagot szintén éterrel kezeljük, ez azonban hatástalannak bizonyult. 7