171139. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kölcsönös specifikus kötésre hajlamos anyagok kvantitatív meghatározására
17 171139 18 ható meg közvetlen radioimmunmeghatározást követve. a) Hepatitisz B antitestek elkészítése Hepatitisz B antitesteket tartalmazó antiszérumot a Journal of Immunology, 109. kötet, 4. szám, 835. oldal irodalmi helyen ismertetett módszert követve állítunk elő. b) A kísérleti eszköz elkészítése Brómciánnal aktivált Sepharose 4B gélt 0,001 mólos sósavban duzzasztunk. Az a) lépés szerint előállított antiszérumban levő antitesteket úgy kapcsoljuk a duzzasztott, brómciánnal aktivált Sepharose 4B gélhez, hogy egy g aktivált Sepharose 4B-re vonatkoztatva 5—20 mg fehérjét tartalmazó antiszérumot elegyítünk a Sepharose gélszuszpenzióhoz 1 órán át 25 C°-on. A kapott keveréket ezután még 17 órán át 4C°-on keverjük. Az antitesttel kapcsolt Sepharose-szuszpenziót ezután egymást követően 0,1 mól trisz-(hidroximetil)-amino-metánt és 0,5 mól nátrium-kloridot tartalmazó, sósavval 8,2 pH-ra beállított pufferrel majd 0,1 mól nátrium-acetátot és 0,5 mól nátrium-kloridot tartalmazó, ecetsavval 4 pH-ra beállított pufferrel mossuk. Az így mosott, antitesttel kapcsolt Sepharose-t ezután annyi trisz-(hidroximetil)-amino-metánban szuszpendáljuk, hogy 50%-os Sepharose-szuszpenziót kapjunk, majd ebből a szuszpenzióból 1-2 ml 3 ml-es, Stylex-típusú és polietilénből készült tartókoronggal ellátott műanyagfecskendőkbe töltünk. c) A meghatározás Az előző lépésben készített oszlopokhoz hepatitisz B antigén jelenlétére nézve pozitív vagy negatív szérummintákat adunk 0,1 ml-es mennyiségekben 30 perces kontaktidőt biztosítva. Az 10 15 35 oszlopokhoz ezután 0,1 ml-es mennyiségekben 1-1,5 órás kontaktidőket biztosítva olyan jelzett mintákat adunk, amelyek '2 s I izotóppal a Journal of Immunology, 109. kötet, 4. szám, 835. oldal irodalmi helyen ismertetett módszerrel jelzett hepatitisz B antitestet tartalmaznak. Az oszlopokat ezután 0,1 mól trisz-(hidroximetil)-amino-metánt, 0,5 mól nátrium-kloridot és 0,01% Tween 20 márkanevű felületaktív anyagot (gyártó cége: Atlas Powder Co., Wilmington, Delaware állam, Amerikai Egyesült Államok) tartalmazó pufferből 25-25 ml-rel mossuk, majd radioaktivitásukat Gammacord típusú gammasugárzásszámlálóval mérjük. Megállapítható, hogy a pozitív szérumokkal érintkezett oszlopok közel tizenkétszer több jelzett antitestet tartanak vissza, mint a negatív szérumokkal érintkeztetett oszlopok. 20 Szabadalmi igénypont: Eljárás kölcsönös specifikus kötésre hajlamos anyagok közül egy specifikus kötést alkotó pár 25 valamelyikének kvantitatív meghatározására, ahol a meghatározandó anyagot és a meghatározandó anyagnak vagy specifikus kötésre képes párjának jelzett formáját olyan mátrixszal érintkeztetetjük, amelyhez a specifikus kötésre képes pár rögzítve 30 van, majd meghatározzuk a jelzett formának azt a mennyiségét, amely a rögzített specifikus kötésre képes párhoz kapcsolódik, vagy pedig azt a mennyiséget, amely a rögzített specifikus kötésre képes párhoz nem kapcsolódik, azzal jellemezve, hogy két végén nyitott oszlopban elhelyezett mátrixot használunk, a jelzett formának a rögzített specifikus kötésre képes párhoz nem kapcsolódó mennyiségét az oszlopból mosófolyadékkal eluáljuk és az eluált jelzett formát vagy pedig az oszlopban 40 maradt jelzett formát ismert módon meghatározzuk. 1 rajz, 1 ábra A kiadásért felel: a Közgazgasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 784396 - Zrínyi Nyomda
