171139. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kölcsönös specifikus kötésre hajlamos anyagok kvantitatív meghatározására
3 171139 4 mértékben egyszerűsítette (lásd például a 3 555 143 számú USA-beli vagy a 159 630 számú magyar szabadalmi leírást). Az ilyen kétfázisú rendszerekben a szilárd fázis az oldhatatlan állapotú specifikus kötésre hajlamos partnerből áll. Adszorpciót, kémiai kötést vagy fizikai kötést alkalmazó módszerek hasznosítása lehetővé teszi a specifikus kötésre hajlamos partnerek oldhatatlanná tételét. A kétfázisú rendszer előnye elsősorban abban áll, hogy a kötött jelzett komponens könnyen elválasztható a nem megkötött jelzett komponenstől. A specifikus kötésre hajlamos anyagok meghatározása szempontjából a specifikus kötésre hajlamos partneréhez kötött jelzett komponens elválasztása a nem kötött komponenstől a legkritikusabb. Általában ennek az elválasztásnak az aránya és megbízhatósága közvetlenül az egész meghatározási módszer elválasztóképességétől és megbízhatóságától függ. A specifikus kötésre hajlamos anyagok meghatározásával kapcsolatban a specifikus kötésre hajlamos partnerek oldhatatlanná tételére szolgáló módszerek közé tartozik a specifikus kötésre hajlamos partner előzetes kicsapása — ezt néha kettős antitest módszernek nevezik, amennyiben a specifikus kötésre hajlamos partner egy antitest —, majd egy akrilamid gélen belüli megkötése és polimerizálása. E célra gyakrabban alkalmaznak olyan módszereket, ahol a specifikus kötésre hajlamos partnert először egy oldhatatlan polimerhez kapcsolják kémiaüag, vagy pedig egy vizsgálati cső belső felületén adszorbeáltalak (lásd például Odell, W. D. és Daughaday, W. H. fent említett könyvét). Jelenleg a specifikus kötésre hajlamos anyagok meghatározására szolgáló olyan ismert módszerek esetében, ahol oldhatatlanná tett specifikus kötésre hajlamos partnert hasznosítanak, zárt vagy úgynevezett nem-átfolyatásos rendszereket, például az oldhatatlanná tett specifikus kötésre hajlamos partnert laza részecskék formájában tartalmazó próbacsöveket vagy olyan próbacsöveket használnak, amelyek belső felületükön adszorbeálódva tartalmazzák a specifikus kötésre hajlamos partnert (ilyen rendszer például a 159 630 számú magyar szabadalmi leírásban ismertetett vizsgálati rendszer). Tekintettel arra, hogy az ismeretlen anyag mintái rendszerint igen hígak, és a zárt rendszerek alkalmazása korlátozza az ismeretlen anyag mintájának térfogatát, a kontaktidőnek hosszúnak kell lennie megbízható eredmények elérésére. Az ajánlott kontaktidő általában 6 óra és 2 nap közötti, sőt bizonyos esetekben hosszabb időn át tartó. Annak ellenére, hogy oldhatatlanná tett specifikus kötésre hajlamos partnert alkalmaznak, a kötött és nem kötött jelzett komponens egymástól elválasztása még mindig további nehézkes műveleteket, így például szűrést, centrifugálást és igen intenzív mosást tesz szükségessé. A leírásban egy anyag folyadékmintában végzett meghatározása alatt a koncentráció meghatározását vagy pedig ennek az anyagnak a folyadékmintában levő abszolút mennyiségének meghatározását értjük. Meglepő módon azt találtuk, hogy ha egyensúlyi, közvetlen vagy telítéses meghatározási módszer kapcsán egy kétfázisú, átfolyatásos meghatározási rendszert alkalmazunk, akkor egy igen előnyös, gyors és megbízható eljáráshoz és eszközhöz jutunk olyan anyagok kvantitatív 5 meghatározásához, amelyek kölcsönös specifikus kötésre hajlamos anyagok valamelyik specifikus kötést alkotó párjának valamelyik tagjai. Az általunk kidolgozott meghatározási rendszerrel meghatározhatók többek között antigének és 1° antitestjeik, haptének és antitestjeik, enzimek és szubsztrátjaik, hormonok és receptorjaik, valamint vitaminok és receptorjaik. Antigénként meghatározható bármely olyan kémiai anyag vagy vegyület, amely reakcióba lép egy antitesttel azzal I5 kötést létesítve. így például egy antigén lehet egy egyszerű antigénszerű fehérje vagy polipeptid, vagy pedig egy antigénszerűen hatásos antigén-antitest komplex. Az általunk kidolgozott eljárás lényege, hogy a meghatározáshoz olyan oszlopot hasz-20 nálunk, amely két végén nyitott és a meghatározandó anyagot tartalmazó folyadék által oldhatatlan, valamint a meghatározandó anyag specifikus kötésre hajlamos partnerét megkötve tartó mátrixot tartalmaz. 25 A mátrix anyaga előnyösen valamilyen polimer anyag. A mátrixhoz a meghatározandó anyag specifikus kötésre hajlamos partnere van kötve, éspedig előnyösen kémiai kötéssel, mely esetben a mátrix előnyösen egy, hidroxil-, primer amino-30 vagy szekunder aminocsoportokat tartalmazó polimer anyag. A megkötött specifikus kötésre hajlamos partner a mátrixhoz kémiailag kötődik, éspedig előnyösen valamilyen, kapcsoló reagensnek nevezhető anyag, előnyösen egy cián-halogenid, egy 35 szerves vagy szervetlen cianát vagy egy epihalohidrin útján. Az általunk kidolgozott eljárás lényegében az alábbi lépésekből áll: (a) a fentiekben ismertetett eszköz mátrixát a meghatározni kívánt anyaggal és 40 e gy olyan jelzett komponenssel érintkeztetjük, amely a meghatározandó anyagnak megfelelő specifikus kötést alkotó pár valamelyik anyagának jelzett formája, majd (b) a találmány értelmében a mátrixot olyan eluáló folyadékkal érintkeztetjük, 45 amely képes az oszlopból az (a) lépés foganatosítását követően előre meghatározott idő eltelte után a meg nem kötött jelzett komponens lényegében teljes mennyiségét eluálni, és (c) meghatározzuk az oszlopban visszamaradó jelzett 50 komponens mennyiségét vagy pedig az eluált jelzett anyag mennyiségét. Az oszlopban visszamaradó jelzett komponens (amely specifikusan kötődik az oldhatatlanná tett, illetve megkötött specifikus kötésre hajlamos 55 partnerhez) relatív mennyiségét előnyösen összehasonlítjuk standard értékekkel, amelyek ugyanabban az oszlopban vagy hasonló oszlopban visszamaradó jelzett komponens olyan relatív mennyiségei, amelyek a meghatározandó anyagból 60 ismert mennyiségeket tartalmazó, különböző koncentrációjú folyadékokból ugyanezen meghatározási módszer esetében maradnak vissza. A specifikus kötésre hajlamos anyagok kvantitatív meghatározására a találmány szerinti meg-65 határozási módszeren belül három alapvető
