171083. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-3-(3',4' -dihidroxi-fenil)-2-metil -alanin-peptidek előállítására
3 171083 4 Az új vegyületeket a találmány szerint úgy állítjuk elő, hogy a II képletű L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanint, amelynek hidroxilcsoportjai és/vagy karboxilcsoportja kívánt esetben a peptidkémiában szokásos valamely védőcsoporttal védve lehet, egy III általános képletű karbonsavval, illetve ezek valamely reakcióképes származékával - ahol A a fenti jelentésű és Z valamely reakcióképes csoportot vagy -NHR általános képletű csoportot jelent, ahol R a fenti jelentésű — kondenzálunk, emellett kívánt esetben az A alkiléncsoportban jelenlevő hidroxilcsoport, valamint az -NHR általános képletű csoport a peptidkémiában szokásos valamely védőcsoporttal védve lehet és a kapott olyan vegyületet, amelyben Z valamely reakcióképes csoportot jelent, ezt utólag egy H2 N—R általános képletű aminnal, ahol R jelentése a fenti, reagáltatjuk, és végül adott esetben a védőcsoportokat ismert módon lehasítjuk. Az I általános képletű vegyületeket a peptidkémia általánosan használatos módszereivel állítjuk elő. A reakciót előnyösen közömbös oldószerek (például dioxán) és vízlehasító szerek (például diciklohexilkarbodiimid) jelenlétében végezzük szobahőmérsékleten. A II képletű és a III általános képletű vegyületben levő hidroxilcsoportok átmeneti védőcsoportjaiként a hidroxilcsoportok megvédésére általánosan használt csoportokat alkalmazhatjuk, például a benzil- vagy benziloxikarbonilcsoportot. A II képletű L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin karboxilcsoportját például észterezéssel, előnyösen valamely rövidszénláncú alifás alkohollal vagy benzilalkohollal végzett észterezéssel védhetjük meg. Az -NHR csoport átmeneti megvédését a szokásos amino-véd^csoportokkal, például a benziloxikarbonilcsoporttal végezhetjük. A III általános képletű karbonsavak reakcióképes származékaiként előnyösen a savhalogenideket, savanhidrideket vagy karbonsavésztereket alkalmazhatjuk. A III általános képletű vegyületek reakcióképes Z csoportjai különösen savgyökök, például halogénhidrogénsavak és szulfonsavak gyökei lehetnek. Gyógyszerkészítmények előállítására az I általános képletű vegyületeket vagy azok gyógyászatilag elfogadható sóit önmagában ismert módon, alkalmas gyógyászati hordozóanyagokkal, aroma-, ízesítő és színezőanyagokkal keverjük össze és például tablettákat vagy drazsékat készítünk belőle vagy megfelelő segédanyagok hozzáadásával vízben vagy olajban, így például olívaolajban szuszpendáljuk vagy oldjuk őket. Az alábbi példákban megnevezett vegyületeken kívül különösen előnyös még a glicil-glicil-L-3-(3', 4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin. A találmány szerinti eljárás szemléltetésére az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa Ghcil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin 5 I. változat 500 ml-es, keverővel és kalciumkloridos csővel ellátott háromnyakú lombikban 250 ml abszolút 10 dioxánban 11,25 g (0,05 mól) L-3-(3',4'-dihidroxT -fenil)-2-metil-alanin-metilésztert (olvadáspont: 164-166 C°, [a]?,0 = -6,3° |C = 1, 1 n sósavban/) szuszpendálunk. Ezután hozzáadunk 12,52 g (0,06 mól) benziloxikarbonil-glicint, majd 10,3 g 15 (0,05 mól) N,N'-diciklohexilkarbodiimidet, és az elegyet szobahőmérsékleten, a nedvesség kizárásával keverjük. Már néhány perc múlva megkezdődik a N,N'-diciklohexilkarbamid kikristályosodása. 20 Az elegyet további 4 órán át keverjük és 16 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a karbamidot kiszűrjük (10,0 g, 89,4%), és" a szűrletet vákuumban bepároljuk. Az erősen viszkózus maradékot 150 ml etilacetátban felvesszük, és egy-25 mást követően 4 x 20 ml körülbelül 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, 4 x 20 ml In sósav-oldattal és 2 x 30 ml vízzel mossuk. A kívánt reakcióterméket tartalmazó etilacetátos fázist nátriumszulfáttal végzett szárítás után vákuumban be-30 pároljuk. 20,82 g (100,0%) benziloxikarbonil-glicil-L- 3-( 3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-metilésztert kapunk színtelen, amorf por alakjában, amely vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint csak kis mértékben szennyezett. 35 Tisztítás céljából a nyers terméket feloldhatjuk 100 ml 15:1 arányú kloroform-metanol elegyben és oszlopon (Kieselgel 60, 70-230 mesh, gyártja Merck, az oszlop mérete: 90x5,5 cm) ugyanazzal 40 az oldószer-eleggyel kromatografálható. Kitermelés: 17,5 g (84,1%) színtelen, amorf por. • A metilészter-csoport elhidrolizálása céljából 10,4 g (0,025 mól) benziloxikarbonil-glicil-L-3-(3',4'-45 -dihidroxi-fenil)-2-metil-alanin-metilésztert bemérünk egy keverővel, csepegtetőtölcsérrel és gázbevezetésével ellátott háromnyakú lombikba. A levegőt gyenge nitrogén gáz árammal teljesen eltávolítjuk, majd a csepegtetőtölcséren keresztül beadagolunk 50 95 ml In nátriumhidroxid-oldatot, és az oldatot 30 percen át keverjük szobahőmérsékleten, Ezután hozzácsepegtetünk 95 ml In sósav-oldatot. A nyers hidrolízis termék nagyon viszkózus olajszerű anyag alakjában válik le, 100 ml etilacetátban felvesszük 55 és további tisztítás céljából az etilacetátos oldatból 3x30 ml 10%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal extraháljuk. Az egyesített vizes extraktumból 1 n sósav-oldattal végzett óvatos savanyítással leváasztjuk a szabad karbonsavat, körülbelül 100 ml etil-60 acetátban felvesszük és nátriumszulfáttal szárítjuk. Az oldószer vákuumban történő teljes ledesztillálása után 9,0 g (89,5%) vékonyrétegkromatográfiásan egységes benziloxikarbonil-glicil-L-3-(3',4'-dihidroxi-fenil)-2-metil-alanint kapunk színtelen, 65 amorf habszerű anyag alakjában. 2
