170725. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-L- aszparagil- L-fenilalanin alkilészterek előállítására
7 170725 8 4. példa a-aszparagil-L-fenilalanin Keverővel felszerelt 2 literes edényben levő 441 g 5 97%-os hangyasavhoz cseppenként hozzáadunk 286 g (2,8 mól) ecetsavanhidridet 95 perc leforgása alatt. A hozzáadás befejezése után az oldatot 45 percig szobahőmérsékleten keverjük. Ehhez az oldathoz egy adagban hozzáadunk 147 g (1,1 mól) L-aszparaginsavat és a ke- 10 verést szobahőmérsékleten 3,5 óra hosszat tovább folytatjuk. A felesleges hangyasavat 30—60 Hgmm nyomású vákuumban frakcionált desztilláció útján eltávolítjuk. Ezt követően ecetsavat (244 g) adunk a desztillációs maradékhoz olyan mennyiségben, hogy a jelenlevő ecet- 15 sav 379 g legyen. Ehhez az N-formil-L-aszparaginsavanhidrid-oldathoz 50 C°-on 1 óra leforgása alatt adagonként hozzáadunk 147 g (1,05 mól) L-fenilalanint. A reakcióelegyet 50 C°on 1,5 óra hosszat keverjük. 20 A kapott reakciómasszát, amely mind az a-alakú, mind a ß-alaku terméket tartalmazza, 875 ml vízzel és 195 g 37%-os sósavval kezeljük, majd 4 óra hosszat 60 C°-on melegítjük. A terméket ezután kicsapjuk az előzőleg így hidrolizált oldatból azáltal, hogy 235,6 g 25 50%-os nátriumhidroxid-oldatot adunk hozzá. A szilárd részt centrifugálással elkülönítjük és 150 ml vízzel mossuk. A terméket szárítjuk és így 146,4 g anyagot kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiás úton vizsgálva 95%-on felüli tisztaságú a-L-aszparagil-L-fenilala- 30 nin. Mg1 + 27,7, C =0,9, 75%-os vizes ecetsav. 5. példa 35 a-L-aszparagil-L-fenilalanin 6,0 g (0,042 mól) N-formil-L-aszparaginsavanhidrid 15,1 ecetsavval készített 50%-os szuszpenziójához 45 40 perc leforgása alatt adagonként hozzáadunk 6,92 g (0,042 mól) L-fenilalanint. A hozzáadás befejezése után az elegyet 30 percig keverjük. Ezt a reakciómasszát, amely mind a-alakú,vmind pedig ß-alaku terméket tartalmaz, 35 ml vízzel és 7,8 g 45 37%-os sósavval 4 óra hosszat 60 C°-on keverjük. A terméket a hidrolizáló oldatból 8,1 g 50%-os nátriumhidroxid-oldat hozzáadása útján kicsapjuk. A szilárd részt szűréssel elkülönítjük és 5 ml vízzel mossuk. Az elkülönített szilárd anyagot szárítjuk és így 7,1 g termé- 50 ket kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiás elemzés alapján oc-L-aszparagil-L-fenilalanin. [a&° + 29,5, C = 8, 75%-os ecetsav. 55 6. példa 0,825 g (5 mmól) L-fenilalanint feloldunk 20 ml 0,5 g (5 mmól) trietilamint tartalmazó vízben és a keletkező oldatot jeges fürdőben hűtjük. A hűtött és kevert ol- 60 dathoz öt perc leforgása alatt hozzáadunk 0,83 g (5,5 mmól) L-aszparaginsavanhidrid-hidrokloridot. Az anhidrid azonnal feloldódik. Az oldatot 5 C°-on két óra hosszat keverjük, utána pedig keverés közben hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni. 65 A reakcióelegy vékonyrétegkromatográfiás elemzése azt mutatja, hogy az elegy közelítőleg 20% a-L-aszparagil-L-fenilalanint tartalmaz. 7. példa 46 mg (0,16 mmól) a-L-aszparagil-L-fenilalanin, 35 mg (0,18 mmól) p-toluolszulfonsav-monohidrát és 0,5 ml vízmentes metanol oldatát 1,5 óra hosszat a visszafolyatás hőmérsékletén (64,7 C°) tartjuk. A kapott hozamok a kezdetben adagolt a-L-aszparagil-L-fenilalaninra vonatkoztatva (TLC) a következők: Termék % a-L-aszparagil-L-fenilalanin-metilészter 35—40 a-L-aszparagil-L-fenilalanin (reagálatlan) 15—20 aszparaginsavészter 15—20 diészter 15—20 8. példa 46 mg (0,16 mmól) a-L-aszparagil-L-fenilalanin, 1,1 ml 0,37 n H2 S0 4 —CH 3 OH oldat (kénsavtartalom 0,2 mmól) és 4 ml vízmentes metanol oldatát 1,5 óra hosszat a visszafolyatás hőmérsékletén (64,7 C°) tartjuk. A kapott hozamok a kezdeti a-L-aszparagil-L-fenilalaninra számítva (TLC-vel meghatározva) a következők : Termék % a-L-aszparagil-L-fenilalanin- T -metilészter 15—20 a-L-aszparagil-L-fenilalanin (reagálatlan) 35 aszparaginsavészter 10 diészter nyomokban 9. példa 46 mg (0,16 mmól) a-L-aszparagil-L-fenilalanin, 0,43 mmól pirofoszforsav és 5 ml vízmentes metanol oldatát a visszafolyatás hőmérsékletén (64,7 C°) tartjuk 3 óra hosszat. A kapott hozamok a kezdeti a-L-aszparagil-L-fenilalaninra yonatkoztatva (TLC-vel meghatározva) a következők: Termék % a-L-aszparagil-L-fenilalanin-metilészter 20—25 a-L-aszparagil-L-fenilalanin (reagálatlan) 35 aszparaginsavészter 20—25 diészter 5—10 10. példa a-L-aszparagil-L-fenilalanin-metilészter 1,86 g a-L-aszparagil-L-fenilalanin és 2,9 ml 2,6 n sósavas metanol, valamint 7,2 ml metanol oldatát 2 óra hosszat 30 C°-on keverjük. A kapott hozamok a kezdeti 4
