170700. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 6-[2-(p- hidroxifenil)- 2-amino- acetilamino]-2,2- dimetilpenám- 3-karbonsav- származékok előállítására

% WPP \ hígításps vizsgálattal a következő módon határpztu,k meg; Alkalmas steril yiyőanyagban az antibiotikum 200Q jjig/ml koncentrációjú törzsoldatát állítottuk elő. Steril, 1/20 mólos, 6,5 pH-jú káliumhidrogénfoszfát és nátri- 5 urßbidrpxid |art^rfl^ f^szfóf-pu^er-pl^attal kétszeres hígításokat állítottunk elő. Mindegyik hígításból 1 ml-t steril Petri-csészében 19 ml agyvelő-szív-fpzetet tartalmazó agárba vittük be. A megkeményedett felületet a vizsgálandó mikroorganizmussal beoltottuk, és 24 óra lp hosszat 37 C°-on inkubáltuk. A legkisebb gátló koncentrációt (MIC), vagyis a vizsgált mikroorganizmus pöyekedését tökéletesen megszüntető legkisebb antibiotikum koncentrációt yig/ml-ként fejezzük ki. Néhány esetben a legkisebb gátló koncentráció érfé; 1? keket a következőképpen végrehajtott sorozatos mikrohígításos próbával határoztuk meg: A vizsgálatidé antibiotikum ismert koncentrációjú törzsoldatának két cseppjét steril Pasteur-pipettával 2p 9 számozott mélyedést tartalmazó próbalemez első mélyedésébe vittük be. Miután a pipettát fiziológiás natriumklorid-oldatta] háromszor kiöblítettük, a táptalaj-közegben levő vizsgálandó mikroorganizmus törzsoldatának két cseppjét a nyolcadik mélyedés kivételével mindegyik mélyedésbe cseppentettük. Az első mélyedésben a vizsgálandó vegyület oldatának koncentrációja felére hígult, ekkor az első mélyedésben levő folyadékot összekeverve, ebből a keverékből két cseppet a rnásodifc mélyedésbe cseppentettünk, és így tovább frigHya egészen a nyolcadik mélyedésig, a vizsgálandó vegyület oldatát mértani sor szerinti hígításokban kaptuk. A kilencedik mélyedés nem tartalmazott antibiotikumot, és vakpróbaként a vizsgált mikroorganizmus növekedésének összehasonlítására szolgált. A próbalemezt 30 vagy 37 C°-oo 18 óra hpsszat inkubáltuk. Ezzel a vizsgálati módszerrel meghatározott Jegkjsebb gátló koncentráció értékeket a következő táblázatban zárójelben tüntetjük fel. A következőkben lejjf 4., |. és. 7. példák szerint előállított vegyületek legkisebb gátló, kpn^ centrációit határoztuk meg. Legkisebb gitlási koncentráció yg/ml Törzs Félda szerinti vegyület 5A 7 4 5B ampicülin karbenicillin Baktérium Grám-pozitív Streptococcus haemolyticus A ÍÓ88 Q,4 0,75 0,75 \A 0,75 Q.» Streptococcus faecal is L 80 6 12,5 50 6 0,8 25 Diplococcus pneumoniae L 54 0,75 (12) 25 6 0,05 0,75 Sarciná lutea ATCC 9341' 0,5 (0,25) 1,5 (0,06) Gram-negatív Haemppliilus suis A 2096 0,45 (1,9) (0,9) (0,3) (1,2) 0,15 0,8 (0,3) Brucella suis A 2126 Q4 (0,9) 1,5 0.2) 0,15 3 Pasteurella multocida A 723 0,8 12,5 1,5 3 0,4 0,2 Klebsiella pneumoniae A 809 10Q :>100 1QQ 100 25 >1Ö0 Salmonella dublin P 43 3 6 1,5 6 Salmonella typhimurium R 172 3 25 25 6 3 6 Escherichia coli U 20 3 25 6 12,5 Pseudomonas aeruginosa 50 50 50 25 >100 50 H 10 2396 3 12,5 6 12,5 50 50 A 1058 3(6) 3 (3,7) 3(15) 3(4) 50 37 Proteus rettgeri A 821 0,06 0,5 0,25 0,25 3 0,3 Proteus míríbiiis H 3 0,5V 1,5 0,5 1,5 3 Ö,8i L93 Ö,Í2 1,5 0,5 0,5 3 6,5 A 1200 0,75 (0,3) 3 (1,2) 1,5 (0,45) 0,75 (0,45) 3 0,4 Proteus morganii 2241 50 50 100 ' 50 ' ( ) mikro sorozathígításos vizsgálat A találmány szerinti vegyületcsoport néhány jellegzetes tagját in vivo kísérletekben vizsgálva a következő eredményeket kaptuk; 4