170670. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptid-peptidohidroláz-típúsú proteolitikus enzimek mennyiségének meghatározására, és eljárás a reagensek előállítására
21 170670 22 (74%) amorf (XXIVa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pt elegy) egységes, [a]" = — 5,0° (c = 0,6, dimetilformamidban). b) lépés: N;-4-Aminobutiril-Phe-Val-Arg-pNA.2HCl (XXIV) Kiindulási anyagként 291 mg (0,362 mmól) (XXIVa) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 33%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 167 mg (66%) amorf, 10,05% klórtartalmú (XXIV) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. [a]g = -35,3° (c=0,72, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; Phe: 1,0; Arg: 1,1. 25. példa Na -2-(4-Amino-fenil)-acetil-Phe-Val-Arg-pN A. 2HC1 (XXV) a) lépés: Noc -2-(4-Cbo-amino-fenil)-acetil-Phe-Val-Arg(N02 )-pNA (XXVa) Kiindulási anyagként 200 mg (0,278 mmól) (Ic) képletű vegyületet és 152 mg (0,371 mmól) 2-(4-amino-fenil)-acetil-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 201 mg (85%) amorf (XXVa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes. [<X]D — —4,3° (c — 0,5, dimetilformamidban). b) lépés: N°'-2-(4-Amino-fenil)-acetil-Phe-Val-Arg-pNA.2HCl(XXV) Kiindulási anyagként 97,5 mg (0,114 mmól) (XXVa) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 33%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 43,5 mg (51%) amorf, 9,47% klórtartalmú (XXV) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes, [ag,3 = -33,0° (c=0,75, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,1. 26. példa N«-Bz-C-Ph-GIy-Val-Arg-pNA. HCl (XXVI) a) lépés: Cbo-C-Ph.Gly-Val-Arg(N02 )-pNA(XXVIa) Kiindulási anyagként 230 mg (0,568 mmól) Cbo-C-Ph.Gly-OpNP-t és 250 mg (0,437 mmól) (Ib) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa c) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 292 mg (95%) amorf (XXVIa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes, [a]" = +8,2° (c = 0,5, dimetilformamidban). b) lépés: N«-Bz-C-Ph.Gly-Val-Arg(N02)-pNÁ (XXVIb) Kiindulási anyagként 290 mg (0,41 mmól) (XXVIa) 5 képletű vegyületet és 130 mg (0,575 mmól) Bz2 0-t használunk. A reakciót az 1. példa d) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 211 mg (76%) amorf (XXVIb) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkroma-10 tográfiásan (futtatószer: Pt elegy) egységes, [a]" = + 10,4° (c =0,51, dimetilformamidban). c) lépés: N«-Bz-C-Ph.Gly-Val-Arg-pNA. HCl (XXVI) 15 Kiindulási anyagként 200 mg (0,296 mmól) (XXVIb) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 33%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 186 mg (95%) amorf, 20 5,25% klórtartalmú (XXVI) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes, [aß5 = -27,0° (c=0,67, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; C-Ph.Gly: 1,2; Arg: 0,9. 27. példa Na -Bz-Phe-Phe-Val-Arg-pNA . HCl (XXVII) 30 a) lépés: N0t -Bz-Phe-Phe-Val-Arg(NO 2 )-pNA (XXVIIa) Kiindulási anyagként 141 mg (0,163 mmól) (IVa) kép-35 létű vegyületet és 90 mg (0,4 mmól) Bz2 0-t használunk. A reakciót az 1. példa d) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 114 mg (84%) amorf (XXVIIa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan 40 (futtatószer: Pt elegy) egységes, [aifg = — 0,75° (c = 1,2, dimetilformamidban). b) lépés: N«-Bz-Phe-Phe-Val-Arg-pNA. HCl (XXVII) Kiindulási anyagként 71 mg (0,087 mmól) (XXVIIa) 45 képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 33%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 47 mg (60%) amorf, 4,23% klórtartalmú (XXVII) képletű vegyületet ka-50 punk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; Phe: 2,3; Arg: 1,0. 55 28. példa N«-Bz-DL-C-Ph.Gly-Val-Arg-pNA. HCl (XXVIII) a) lépés: Cbo-DL-C.-Ph.Gly-Val-Arg(N02 )-pNA 60 (XXVIIIa) Kiindulási anyagként 285 mg (0,5 mmól) (Ib) képletű vegyületet és 285 mg (0,7 mmól) Cbo-DL-C-Ph.Gly-OpNP-t (op.: 107—108 °C) használunk. A reak-65 ciót az 1. példa c) lépésében leírt módon végezzük. 11
