170665. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminocukor származékok tiszta állapotban való elkülönítésére keverékeikből
9 170665 10 Rf-értékek: II. komponens 0,47 maltóz 0,54 glükóz 0,66 A II. komponens Kieselgel-lemezen való láthatóváté- -teléhez a legalkalmasabb az AgN03/NaOH permetező reagens. Már szobahőmérsékleten vagy kismértékű melegítés után barna-fekete színeződés következik be. b) Gázkromatográfia 10 A II. komponenst a gázkromatográfiai vizsgálathoz az a- és ß-D-glükozzal együtt és a szacharózt mint belső standardot piridin (1), trimetilklórszilán (0,5) és N-metil-trimetil-szilü-trifluoracetamid (1) elegyében szililezzük. j5 Oszlop: 91,5 cm hosszú üveg, 3% SE 30-val töltve Chromosorb WAW-on Hőmérsékletek: beadagoló blokk: 300 °C detektor: 300 °C 20 kemence 220 °C izoterm az <x- és ß-D-glükóz sávok eluciójáig; ezt követően hőmérséklet-emelés 15 °C/perc 300 °C-ig Detektor: lángiönizációs detektor (FID) Gázok: vivőgáz: N2 40 ml/perc égetőgáz: levegő 80 ml/perc H2 20 ml/perc Retenciós idők: a-D-glükóz 3 perc ß-D-glükoz 4 perc szacharóz 12—13 perc II. komponens 16—17 perc c) Forgatóképesség A II. komponens metanolos oldatának bepárlásával nyert, nem kristályos próbát vízben oldottunk és meghatároztuk a specifikus forgatóképességet: [aJD = +134,3°. d) Infravörös-spektrum A spektrumból kevés következtetés vonható le, roszszul strukturált spektrum KBr-ben. Fő abszorpciós sávok az O—H és C—O vegyértékrezgések tartományában. e) NMR-spektrum CD3 OD-ben 220 MHz-en (lásd 1. ábra) 8 (ppm) 1,3 2,3 3,15 3,3—3,9 4,13 4,48 \ 5.1 J 4,9 5,0 5,8 Multiplicitás Relatív intenzitás Dublett; J=6,5 Hz 3H „Triplett", Jt és J 2 8—10 Hz 1 H „Triplett", Jt és J 2 7—9 Hz 1 H A jeleket nem kell egyenként egy- 12 H más mellé rendelni AB-rendszer; J = 12 Hz 2H Dublett; J= 7 Hz 1 Dublett; J = 2,5 Hz J Dublett; J= 7 Hz 1 Dublett; J = 2,5 Hz J 1 H Szingulett 11 H deutériumra kicserélt protonok Dublett; J=2—3 Hz 1 H (rosszul feloldott) Dublett; J = 3—4 Hz 1 H (rosszul feloldott) 33 H 25 30 40 45 50 55 60 65 f) A II. komponens acetilezése A II. komponenst 1: 1 arányú ecetsavanhidrid-piridin elegyben szobahőmérsékleten dekaacetil-származék -ká reagáltatjuk (molekulasúly: 903). Ha a reakciót 1: 1 arányú jégecet-ecetsavanhidrid elegyben katalitikus mennyiségű kénsavval valósítjuk meg, a dekaacetilszármazék mellett tömegspektroszkópiásan undekaacetil-származék (molekulasúly: 945) jelenléte is bizonyítható. A dekaacetil-származék NMR-spektrumát a 2. ábra mutatja. A dekaacetil-származék tömegspektruma: molekulacsúcs: 903 (2,5% relatív intenzitás) báziscsúcs: 843 A felső tömeg-tartományban levő fontos fragmens-csúcsok: 844 (55% 784 (36% 783 (34% 759 (35% 556 (36% 496 (37% 436 (29% relatív relatív relatív relatív relatív relatív relatív intenzitás) intenzitás) intenzitás) intenzitás) intenzitás) intenzitás) intenzitás) g) II. komponens metilezése A II. komponenst dimetilszulfoxidban CH3J/NaH-val Hakomori szerint metilezve [Journal of Biochemistry (Tokió) 55, 205 (1964)] főtermékként a II. komponens dekametil-származéka keletkezik, valamint kisebb menynyiségben undekametil-származék is. 35 Tömegspektrum: molekulacsúcs: 623 (6,1% relatív intenzitás) báziscsúcs: 535 2. molekulacsúcs: 637 (0,2 relatív intenzitás) A II. komponens az a- és ß-alak keverékeként fordul elő, ahogyan azt különösen az NMR-spektrumok mutatják. A homológ sor következő tagja, a III. komponens (C25H 4 30 18 N) az alábbi fizikai-kémiai tulajdonságokkal és reakcióképességgel jellemezhető: A III. komponens vízben jól oldható amorf szilárd termék. a) Vékonyrétegkromatográfia Futtatószer: etilacetát-metilalkohol-víz 10: 6: 4 I. F 1500 Kieselgél-lel készített DC-kész lemezek (gyártja Schleicher und Schüll) Rf-értékek: III 0,35 maltóz: 0,50 DC-kész lemezek II. F. 254 Kieselgel-lel készített (gyártja Merck) Rf-értékek: III 0,33 maltóz 0,54 A III. komponens AgN03NaOH reagenssel, permetezéssel előhíva már szobahőmérsékleten vagy a lemez gyenge melegítésével barna-fekete színeződést mutat. 5
