170645. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, 2-oxo-oxazolidin- vagy 2-oxo-tiazolidingyűrűt tartalmazó tripeptidek előállítására
7 170645 8 Vékonyréteg-kromatográfiás Rf érték 0,18 futtatószerként n-butanol : etil-acetát: ecetsav : víz = 1 1:1:1:1 elegyét és alaplemezként a F-254/366 jelzésű, előzetesen bevont szilikagél-lemezt (gyártó cége a Woelm Német Szövetségi Köztársaság-beli cég) használva. A termék negatív ninhidrinreagensre és pozitív a Pauly-reagensre. 2. példa L-transz-5-Metil-2-oxo-oxazolidin-4-karbonil-L-hisztidil-L-prolinamid előállítása 5 ml dimetil-formamidban feloldunk 650 mg (2 mmól) L-hisztidil-L-prolinamid-dihidrokloridot, 311 mg (2,2 mmól) L-transz-5-metil-2-oxo-4-karboxi-oxazolidint és 250 mg N-hidroxi-szukcinimidet. Jéggel végzett hűtés közben az így kapott oldathoz 0,51 ml N-etil-morfolint, majd 453 mg (2,2 mmól) N.N'-diciklohexil-karbodiimidet adunk. A kapott elegyet 15 órán át keverjük, majd az oldhatatlan anyagok eltávolítására szűrjük és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot feloldjuk kloroform és metanol 9 : 1 arányú elegyéből 2 ml-ben, majd a kapott oldatot felvisszük szilikagélből készült, 3x7 cm méretű oszlopra. Az oszlopot először kloroform és metanol 8 : 2 arányú elegyéből 40 ml-rel mossuk, majd a terméket kloroform és metanol 4 :6 arányú elegyével eluáljuk. Az eluátumból az oldószerelegyet ezután csökkentett nyomáson végzett desztillálás útján eltávolítjuk, majd a maradékot 5 ml vízben feloldjuk. A vizes oldatot felvisszük egy agar-agar gélből (azaz a Pharmacia A.S. svédországi cég Sephadex LH-20 márkanevű termékéből) készült, 2 x 50 cm méretű oszlopra, majd 30-38 ml 0,1 g ecetsavoldattal eluálunk 8 ml-es frakciókat szedve. A terméket tartalmazó frakciókat liofilizáljuk. így 250 mg (33r/o) L-transz-5-metil-2-oxo-oxazolidin-4-karbonil-L-hisztidil-L-prolinaimidot kapunk fehér por alakjában. '[ajo5 = - 41,1° (c : 0,52,5%-os ecetsavoldat). Aminosav elemzés: Thr,:His : Pro = 1,00 : 1,00 : 0,97. Vékonyréteg-kromatográfiás Rf érték 0,24 az 1. példában ismertetett összetételű fúttatószerrel és minőségű alaplemezzel. 3. példa L-2-Oxo-tiazolidin-4-karbonil-L-hisztidil-L-prolinamid előállítása. 6 ml dimetil-formamidban feloldunk 260 mg (2 mmól) L-2-oxo-4-karboxi-tiazolidint, 650 mg L-hisztidil-L-prolinamid-dihidrokloridot és 271 mg N-hidroxi-benztriazolt. A kapott oldathoz ezután jeges hűtés közben 0,3 ml trietil-amint, majd 460 fríg N,N'-diciklohexil-karbodiimidet adunk. A kapott elegyet 20 órán át keverjük, majd ezt követően szűrjük. A szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk, majd a maradékot 20 ml vízben feloldjuk. A kis mennyiségű oldhatatlan anyagot kiszűrjük, majd a szűrletet Carboxymethyl-Sephadex márkanevű anyagból álló, 2 x 30 cm méretű oszlopra felvisszük. Az oszlopot_ ezután gradienseluálás módszerével Omol és 0,1 mól közötti molaritású vizes ammónium-acetát-oldatokkal kezel-5 jük (500 ml - 500 ml) 90 ml-es frakciókat szedve. A terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, majd liofilizáljuk. így 430 mg fehér port kapunk. Aminosav elemzés eredménye: Cys: His : Pro = 0,73 : 1,00:0,98. 0 Vékonyréteg-kromatográfiás Rf érték 0,20 az 1. példában ismertetett összetételű futtatószerrel és minőségű alaplemezzel. 4. példa Gyógyászati készítmények előállítása. 2o a) 50 ml kétszer desztillált vízben feloldunk 50 mg L-2-oxo-oxazolidin-4-karbonil-L-hisztidü-L-prolinamidot, majd a kapott oldathoz 10 ml In foszforsav-puffert (pH-ja 4,5) adunk. Ezután az oldathoz izotóniássá tételéhez szükséges mennyiség-25 ben nátrium-kloridot adunk, majd kétszer desztillált vízzel végső térfogatát 100 ml-re beállítjuk. Hevítés útján végzett sterilizálás után az oldatot szűrjük, majd 1 vagy 2 ml-jét ampullákba töltjük 30 és ott liofilizáljuk. b) 10 mg benzilalkoholhoz annyi 2-oktadekanolt adunk, hogy az össztérfogatuk 990 ml legyen. Ezután ehhez a keverékhez 10 g L-transz-5-metil-2--oxo-oxazolidin-4-karbonil-L-hisztidil-L-prolinamidot 35 adunk, majd a keveréket addig keverjük, míg homogén oldatot kapunk. c) 20 g L-2-oxo-tiazolidin-4-karbonil-L-hisztidil-L-prolinamid, 10 g benzilalkohol és 40 g szorbitán-szeszkvioleát keverékéhez addig adunk oleil-oleá-40 tot. míg az elegy össztérfogata 1000 ml lesz. Az a), b) és c) pontok szerint előállított készítmények egyaránt parenterálisan használhatók fel. Szabadalmi igénypontok: 45 1. Eljárás I általános képletű vegyületek— ahol R[ jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, R2 és R 3 hidrogénatomot jelentenek, és 50 X jelentése oxigén- vagy kénatom -, valamint gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely II általános képletű vegyületet — ahol Rx, R 2 és X jelentése a fenti — a III képletű vegyülettel — ahol 55 R3 jelentése a fenti — kondenzáljunk, mimellett a kiindulási vegyületek reakcióba nem lépő amidovagy aminocsoportja adott esetben védőcsoporttal védett és reakcióba lépő amino- vagy karboxilcsoportja kívánt esetben reakcióképes származékká 60 alakított, majd adott esetben a kapott vegyületről a védőcsoportot vagy védőcsoportokat lehasítjuk, és kívánt esetben a kapott I általános képletű vegyületet valamely megfelelő savval végzett kezelés útján gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sójává 65 alakítjuk. 4
