170622. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szinergetikus hatású vírusellenes készítmény előállítására
13 170622 14 XVII. készítmény 2. példa A XIV. jelzésű készítményeknél követett módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy 5,0 aktivátort és 200 jug induktort alkalmazunk az alábbi összetételben: A,(l,32, 90) - poli I : C (12,2, 6,3) XVIII. készítmény A XIV. jelzésű készítményeknél követett módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy 5,0 mg aktivátort és 50 mg induktort alkalmazunk, például az alábbi összetételben: A, (1,32,90) - poli I : C (7,3,3,4) XIX. készítmény A XIV. jelzésű készítménynél követett módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy 100 mg aktivátort és 2,0 mg induktort alkalmazunk a XVIII. jelzésű készítmény szerinti összetételben. A találmányt közelebbről az alábbi példák szemléltetik, anélkül azonban, hogy igényünket azokra korlátoznánk. L-929 egér fibroblaszt sejteket inkubálunk szövettenyészetben, majd az eredeti táptalajt olyan friss 5 táptalajra cseréljük, amely 10%-ban az I/a-I/g H/a - Il/g Hl/a - Ili/g 10 IV/a -IV/g V/a - V/g Villa -Vll/e VIII/a -VIH/h IX/a-IX/j 15 X/a -X/d Xl/a -Xl/b Xl/d - Xl/e Xll/a - Xll/d 20 jelű készítmények valamelyikét, vagy VI/a-i. jelű készítmények közül lOOml-enként egy ampulla tartalmát, vagy a XIII/a-i. készítmények közül 100 ml-enként egy tablettát tartalmaz. A sejtkulturákat 37 C° hőmérsékleten 12 órán át 25 inkubáljuk, mossuk, VSV vírussal felülfertőzzük, majd 37T°-on 92 órán át tovább inkubáljuk. A tenyészeteket mikroszkopikusan és/vagy plaque titrálással vizsgáljuk. Vírusszaporodás egyetlen eset-30 ben sem észlelhető. 1. példa Egér L-929 fibroblaszt sejteket a fent megadott szővetkultúra táptalajban tenyésztünk, majd az eredeti táptalajt új táptalajokkal cseréljük fel, amelyek egyrészt azonos (20-20 Mg/ml) koncentrációban A! jelzésű aktivátorokat, és olyan poli I: C-t tartalmaznak, amely Sw = 12,2 értékű poli I-ből és Sw = 6,3 értékű poli C-ből 1 : 1 súlyarányban a fent megadott eljárás szerint állítunk elő. A sejttenyészetek olyan sorozatát állítjuk be, amelyben a poli I: C koncentrációja 10 Mg/ml és 10"6 Mg/ml között változik. A sejttenyészeteket 12 óra 37 C°-os inkubálás után mossuk, majd VSV vírussal felülfertőzzük és 92 órás 37 C°-on történő inkubáció után meghatározzuk a poli I: C minimális aktív dózisát a különböző minőségű aktivátorok jelenlétében. Az eredményeket 50 az 1. táblázat tartalmazza. 1. táblázat 3. példa 35 Primer humán foetusból készített szövettenyészetet inkubálunk a fentiekben ismertetett)táptalajban, majd a táptalajt friss táptalajra cseréljük fel, amely az I/h-I/i U/h -H/i Ill/h - Ill/i IV/h - IV/i V/h -V/i Vll/h - Vilii XI/f.,XI/c.,XI/g jelű készítményeket 10%-os koncentrációban, vagy 100 ml-enként a VI/h-i. jelű készítmények egy ampullájának tartalmát, vagy 100 ml-enként XIII/h-i, jelű készítmények egy tablettáját tartalmazza. A továbbiakban a 2. példa szerint járunk el. Egyik készítmény esetében sem észlelhetünk vírusszaporodást. 40 45 Aktivátor Minimális aktív dózis Mg/ml Aj (0,92,94) 5,10"4 AÍ (1,13,96) 1.10"4 A, (1,17,99) 5,10-s Aj (1,52,94) Í.IO"4 Aj (2,92, 82) 5,10"5 Ai (2,00,98) i,io-s DEAE-dextrán 1,10"3 Aktivátor nélkül 2,10° 55 60 65 4. példa A XIV/a-c. jelű készítmények valamelyikéből 1 ampulla tartalmát feloldunk 1 ml steril fiziológiás sóoldatban, majd az oldat 0,1 ml-jét intraperitoneálisan adjuk 20-22 g súlyú CFLP albino hím egereknek. Négy óra múlva a fentiekben leírt módszer szerint határozzuk meg az állatok vérében a vírusellenes anyagok titerét. Az eredményeket a 2. táblázatban adjuk meg. 7
