170522. lajstromszámú szabadalom • Eljárás élő legyengített influenza-vírustörzsek és ezeket tartalmazó vírus-vakcinák előállítására
11 170522 12 adtunk be. Ez a vakcinamennyiség 107,S EID 50 egységnek felel meg. 40 kísérleti személynél (azaz az esetek 80%-ában) szérum-konverziót észleltünk, a kísérleti személyeknél csak enyhe klinikai reakcók (1-2 napon át tartó savós orrváladék-képződés vagy orr-eltömődés) léptek fel. A kontroli-csoport bevonásával végzett klinikai kísérletekben nem tapasztaltuk az influenza vírus átterjedését. A vírust megkíséreltük a kísérleti személyek orr- és torokkenetéből izolálni, a minták azonban embriót tartalmazó tyúktojásokon végzett két vak kísérlet után negatívok maradtak. 5. példa A 2. példában leírt módon előállított, fagyasztva szárított anyagot (azaz az R 22 törzset (ATCCVR788) használjuk fel oltóanyagként a nagyüzemi vakcinatermeléshez. A fagyasztva szárított törzset embriót tartalmazó tyúktojások allantoisz-folyadékában egy lépésben tenyésztjük. A tojásokat 3 napon át 35 C°-on inkubáljuk. R 22 törzsből előállított, legyengített B-típusú influenza vírus-vakcinával végzett kezelés 5 Anyagok és módszerek: A kísérlethez 6 önként jelentkező, 32-es vagy annál kisebb Hl antitest-faktorú egyént választottunk ki. Két egyént kontrollként vizsgáltunk. A 6 10 kezelt egyénnek 11-14 napos időközben kétszer adtuk be a vakcinát. A fagyasztva szárított anyagot közvetlenül a beadás előtt elegyítettük a folyékony hordozóanyaggal. A kísérleti személyek mindkét orrüregébe minden esetben 5—5 csepp vakcinát 15 adtunk be, ez a vakcinamennyiség 107 ' 5 EID SO egységnek felel meg. Az első vakcinás kezelés napján, az első vakcinás kezelést követő 10-14. napon, valamint a 20 második vakcinás kezelést követő 14. napon a kísérleti személyektől az antitest-faktor meghatározására vérmintát vettünk. A második vakcinás kezelés utáni 14. napon a kísérleti személytől orrkenetet is vettünk. 25 Az allantoisz-folyadékokat elkülönítjük, egyesítjük, megvizsgáljuk sterilitásukat és biztonságukat, majd 5% pepton-koncentráció eléréséig peptonnal elegyítjük. A kapott elegyet 3 ml-es üvegfiolákba 30 osztjuk szét, így egy-egy dózisegységnek megfelelő (azaz legalább 107 EID S0 mennyiségű) víruskészítményt kapunk. A terméket ezután fagyasztva szárítjuk, és a fiolákat leforrasztjuk vagy szorosan ledugaszoljuk. 35 Az így kapott anyagot használjuk fel vakcina-alapanyagként. A vakcina beadása előtt egy fiola tartalmához 0,5 ml vizet, fiziológiás nátriumklorid-oldatot vagy 5%-os vizes szacharóz-oldatot adunk, 40 és a kapott folyadékot az orrüregbe cseppentjük. A peptonnal elegyített allantoisz-folyadékot na- A hat kísérleti személy közül ötnél észleltünk a gyobb fiolákba is szétoszthatjuk, és így több dózis- szérumban és/vagy az orrkenetben reakciót. Az egységet tartalmazó készítményeket állíthatunk elő. 45 eredményeket a 3. táblázatban közöljük. Klinikai tünetek: Klinikai tüneteket nem észleltünk A vírus izolálása: A kezelés 3. és 6. napján valamennyi kísérleti személytől orrkenetet vettünk. Embriót tartalmazó tyúktojásokon végzett kát vak tenyésztési lépés után valamennyi minta negatív maradt. Szerológiai vizsgálatok ereményei és helyi antitestek: 3. táblázat Személy száma Hl-faktor kezelés előtt Hl-faktor a 2. kezelés után Helyi antitestek a kezelés előtt Helyi antitestek a kezelés(2) után 1 32 32 <2 24 2 8 8 <2 2-4 3 32 64 <2 12 4 8 32 <2 <2 5 <8 <8 nv nv 6 <8 16 nv nv nv = nem vizsgáltuk
