170481. lajstromszámú szabadalom • Eljárás uteroevakuáns hatóanyagok elkülönítésére növényi anyagokból

11 170481 12 eleggyel eluáljuk, és az eluátumot 125 ml-es frakciókba gyűjtjük. 25 frakció felfogása után az eluálást 1 : 1 arányú benzol-etilacetát eleggyel folytatjuk. A vékonyrétegkromatográfiás elemzések szerint a kívánt terméket a 28—31. frakció tartalmazza. A 28. frakció 5 bepárlásával 0,046 g részben tisztított anyagot különítünk el. A 29—31. frakciót egyesítjük, bepároljuk, a kapott 0,350 g súlyú maradékot kloroformban oldjuk, az oldatot 5 preparatív vékonyrétegkromatográfiás lemezre visszük fel, és a lemezeket hatszor 10 benzollal, majd háromszor 4 :1 arányú benzol-etilacetát eleggyel kezeljük. A fősávot elkülönítjük, a terméket etilacetáttal leoldjuk, és az oldószert lepároljuk. Részben tisztított terméket kapunk. 15 9. példa 4,5 g a 7. példában ismertetett módon kapott nyers maradékot 50 ml éterben oldunk. Az oldatot szűrjük, 20 és a szűrletet 50 ml telített, vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk. Az éteres fázist nátriumszulfát fölött szárítjuk, majd bepároljuk. A 3,6 g súlyú maradékot 25 ml kloroformban oldjuk, és az oldatot kloroformmal átitatott 200 g semleges szilika- 25 géllel töltött, 40 mm x 40 cm méretű oszlopra öntjük. Az oszlopot kezdetben kloroformmal, majd növekvő mennyiségű izopropanolt tartalmazó kloroform-izopropanol elegyekkel eluáljuk. Az eluátumot 25 ml-es frakciókba gyűjtjük, és 5-5 frakciót 30 egyesítünk. Összesen 75, egyenként 125 ml-es frakciót gyűjtünk össze. Az eluáláshoz a következő oldószer-elegyeket használjuk fel: 35 125 ml-es frakciók szá na Oldószer 1-18. kloroform 40 19—30. 1 :99 arányú izopropanol-kloroform elegy 31-44. 1 :49 arányú izopropanol-kloroform elegy 45 45—51. 3 :97 arányú izopropanol-kloroform elegy 52—66. 1 : 24 arányú izopropanol-kloroform elegy 67—75. 1 : 19 arányú izopropanol-kloroform elegy 50 Az egyes frakciók összetételét a 8. példában megadott módon, vékonyrétegkromatográfiás úton vizsgáljuk. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok eredményei alapján a 49—66. frakciót egyesítjük, 55 majd az oldószert vákuumban, 40 C°-nál alacsonyabb hőmérsékleten lepároljuk. 0,725 g olajos maradékot kapunk. A kapott olajos maradékot további tisztítás 60 céljából szilikagélből készített preparatív vékonyrétegkromatográfiás lemezekre visszük fel. A lemezeket 2 :23 arányú izopropanol-kloroform eleggyel kezeljük, majd a fősávot 1 :3 arányú metanol-kloroform eleggyel leoldjuk. Az oldat bepárlásakor 540 mg súlyú 65 maradékot különítünk el. 400 mg így kapott anyagot a fenti módon ismét kromatografálunk. 268 mg olajos, részben tisztított terméket kapunk. 10. példa 1 g, a 7. példában ismertetett módon kapott nyers maradékot egy 15 ml-es kémcsőbe mérünk be, és a nyers maradékot 5 ml éterrel elegyítjük. A kapott oldathoz 2 ml vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldatot adunk, az elegyet 1 percig keverjük, majd a fázisokat centrifugálással elválasztjuk egymástól, és az éteres fázist eltávolítjuk. A vizes lúgos fázist a fent ismertetett módon 2x2ml éterrel extraháljuk. Az éteres fázisokat egyesítjük, és az oldószert lepároljuk. A maradékhoz kevés Pellosil-t (folyadékkromatográfiához felhasználható szilikagél-töltet, a Reeve Angel and Co. cég gyártmánya) adunk, és a keveréket egy 10 cm x 0,9 cm méretű, Pellosil-t tartalmazó folyadék-kromatográfiás oszlop tetejére töltjük. Az oszlopot Du Pont 830 típusú folyadék-kromatográfba helyezzük, majd 28 atmoszféra nyomáson 30 percig 2,5% dioxánt tartalmazó hexánnal, 30 percig 5% dioxánt tartalmazó hexánnal, végül ismét 30 percig 7,5% dioxánt tartalmazó hexánnal eluáljuk. Gázkromatográfiás és vékonyrétegkromatográfiás elemzéssel, valamint ultraibolya spektroszkópiával (jellemző sáv: 254 nm) kiválasztjuk a kívánt hatóanyagot tartalmazó frakciókat. A 7,5% dioxánt tartalmazó hexánnal végzett eluálás első 10 percéből származó frakciót elkülönítjük, majd a következő 20 perc alatt elkülönített frakciót nitrogénatmoszférában, 50 C°-on szárazra pároljuk. Félig tisztított terméket kapunk. 11. példa Egy 454 liter űrtartalmú, gőzköpennyel körülvett, rozsdamentes acél tartályba 10 kg Montanoa tomentosa- vagy Montanoa floribunda-levelet és 136 liter vizet mérünk be, és a szuszpenziót 2,5 órán át időnkénti kevergetés közben 98-100 C°-on tartjuk. A forró szuszpenziót szűrővásznon szűrjük. Körülbelül 112 liter térfogatú, sötét színű, átlátszó főzetet kapunk. A szilárd maradékot 18 liter forró vízzel mossuk, szűrjük, és a szűrletet a fenti főzettél egyesítjük. A kapott vizes fázist 136 liter etilacetáttal extraháljuk. Az elegyet erélyesen keverjük, majd ülepedni hagyjuk. A felső habos réteg leszivatásával megtörjük az emulziót, majd az etilacetátos fázis lehető legnagyobb részét elkülönítjük. A maradékhoz 90 liter etilacetátot adunk, és a fenti műveletet megismételjük. Az etilacetátos fázisokat egyesítjük, és vákuumban 50 C°-on bepároljuk. A maradékot 3 részletben összesen 10 liter forró (75-80 C°-os) benzollal extraháljuk. A benzolos fázisokat egyesítjük, vákuumban 50 C°-on bepároljuk, majd a maradékot összesen 8 liter forrásban levő hexánnal mossuk. A hexánnal mosott maradékot 2 liter acetonban oldjuk, az oldathoz 10 g csontszenet („Nuchar") adunk, és az elegyet 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A csontszenet kiszűrjük, és a szűrletet vákuumban 30 C°-on bepároljuk. 69 g nyers maradékot kapunk. 6