170461. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vízben oldható enzimek immobilizálására polivinilalkohol-gélbe zárás útján

170461 10 kénti kevertetés mellett. Ezután a gélt újból leszívatjuk, és a folyadékfázisban maradt enzim mennyiségét meghatározzuk (lásd 9. példa). A leszívatott gélt liofilizáljuk, majd a kioldható enzimet az 1. példában leírt módon eltávolítjuk. Immobilizált, aktív formában a bediffundált enzim 5—7%-a kapható meg. A kimosott preparátum újra liofilizálva 5 C°-on lényeges aktivitásvesztés nélkül hónapokig eltartható. 12. példa Penicillin-aciláz bezárása fizikai térhálósítással készített polivinilalkohol hidrogélbe poliakrilamid jelenlétében, beszárítással A 11. példában leírt módon, 5 súly% szárazanyagtartalmú oldatból polivinilalkohol gélt készítünk. A 7. példa szerinti penicillin-acilázból 8% poliakrilamidot tartalmazó pH 8,0 foszfát pufferben kevertetéssel 5 mg/ml-es oldatot készítünk. A továbbiakban a 11. példa szerint járunk el, azonban a liofilizálás helyett vákuumban végzett súlyállandóságig való szárítást alkalmazunk. Immobilizált, aktív formában a bediffundált enzim 5-10 százalékát kapjuk meg, amelynek tárolási tulajdonságai megegyeznek a 11. példa szerint készített preparátum tulajdonságaival. 13. példa Aldoláz bezárása beszárítással készített polivinilalkohol filmbe, zselatin jelenlétében Az 1. példában leírt módon 0,5 mg/ml-es aldoláz oldatot készítünk, 5 mg/ml kereskedelmi zselatint tartalmazó foszfát pufferben. 10 Ugyancsak az 1. példában leírt módon 12 súly%-os polivinilalkohol oldatot készítünk, és ennek 5 ml-éhez 0,5 ml fentiek szerinti, zselatint tartalmazó aldoláz oldatot adunk. A továbbiakban az 1. példa szerint járunk el. Az enzimaktivitásra számolt kitermelés 10%. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás vízben oldható enzimek immobilizálására polivinilalkohol gélbe zárás útján, azzal jellemezve, hogy 15 a) 0,005-3 súly% enzimet, 3-15 súly% polivinilalkoholt, és adott esetben 0,05-8 súly% társpolimert és/vagy adalékanyagot, előnyösen polivinilpirrolidont vagy poliakrilamidot és/vagy inert fehérjét, célszerűen szérumalbumint vagy zselatint 20 tartalmazó oldatból -adott esetben leválasztható-hordozón filmréteget alakítunk ki, és ezt szobahőmérsékleten beszárítjuk, illetve liofilizáljuk, vagy b) 3-15súly%-os polivinilalkohol oldatból fizikai vagy kémiai térhálósítással készített gélbe 25 0,005-5 súly% töménységű enzimoldatból, amely adott esetben 0,05-8 súly% társpolimert és/vagy adalékanyagot, előnyösen polivinilpirrolidont vagy poliakrilamidot és/vagy inert fehérjét, célszerűen szérumalbumint vagy zselatint tartalmaz, a kom-30 ponenseket a gélbe, adott esetben keverés révén bediffundáltatjuk, majd a gél porozitását fizikai úton, előnyösen beszárítással, liofilizálással vagy elektrolitos kezeléssel csökkentjük, és adott esetben az így kapott immobilizált enzim-35 -készítményt dialdehiddel, előnyösen glutárdialdehiddel kezeljük. 2. Az 1. igénypont a) változata szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a vizes 40 polivinilalkohol oldatból nedvesíthető hordozón, előnyösen textílián vagy szűrőpapíron végzett beszárítással képezünk filmet. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 774315 - Zrínyi Nyomda