170416. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás garamin előállítására

170416 8 3. példa * Garamin előállítása a gentamicin-C szulfát tisztításakor kapott előfrakcióból kiindulva A 168 778 számú magyar szabadalmi leírás példájának 3. lépése szerint kapott 41-48. frakciókból származó 8,0 g anyagot feloldjuk 50 ml desztillált vízben és az így kapott oldatot 800 ml ammónium-formájú CM-Sephadex C-25 ioncserélő dextrán-gélt tartalmazó oszlopra .(0 = 5 cm, h = 50 cm) visszük. A garamint sorrendben 2,5 - 2,5 liter 0.10 n, 0,12 n, majd 0,14 n ammóniumhidroxid-oldattal oldjuk le. A leoldást 100 ml/óra sebességgel végezzük. 200 ml-es eluátumfrakciókat szedve a tisztán garamint tartalmazó 13-17-es frakciókat egyesítjük és vákuumban szárazra pároljuk. így 3,7 g garamint kapunk. 10 15 20 Szabadalmi igénypont: Eljárás garamin (0-3-dezoxi-4-C-metil-3--(N-metilamino)-j3-L-arabinopiranozil(1^6)-2-dezoxi-D-sztreptamin) előállítására, azzal jellemezve, hogy a) Micromonospora purpurea var. nigrescens nov. var. X-148 jelzésű sugárgomba-törzset (MNG-122) aerob körülmények között komplex fehérjét, szénhidrátot és ásványi sókat tartalmazó táptalajon 24-45 C°-on tenyésztjük, majd az így kapott fermentléből a garamint pH = 5,0 és 10,0 között, célszerűen pH =6,5-7,5 értéken valamely karboxil-típusú kationcserélő gyantán ammónium-25 30 35 -formában megkötjük és a gyantaágyat híg, maximum 0,08 n ammóniumhidroxid-oldattal átmossuk, ezután a garamint 0,09-0,15 n, célszerűen 0,12 n ammóniumhidroxid-oldattal leoldjuk, és a garamint tartalmazó eluátum-frakciókból a vizet vákuumban történő bepárlással eltávolítjuk, adott esetben a garamint finomszemcsés karboxil-típusú kationcserélő gyantán, híg vizes, 0,08 - 0,50 n, célszerűen 0,12 n ammóniumhidroxid-oldattal újból kromatografáljuk, majd az így kapott anyagot valamely erősen bázisos alkilamino-csoportokat tartalmazó finomszemcséjű anioncserélő gyantán hidroxil-formában megkötjük, a gyantáról ionmentes vízzel szelektíven leoldjuk, majd a garamint tartalmazó frakciókból a vizet vákuumban elpárologtatjuk, vagy b) garamin-tartalmú nyers antibiotikum-elegy, előnyösen nyers gentamicin-komplex vizes oldatából a garamint pH = 5,0 és 10,0 között, célszerűen pH = 6,5 - 7,5 értéken valamely karboxil-típusú kationcserélő gyantán ammóniumformában megkötjük és a gyantaágyat híg, maximum 0,08 n ammóniumhidroxid-oldattal átmossuk, ezután a garamint 0,09-0,15 n, célszerűen 0,12 n ammóniumhidroxid-oldattal leoldjuk, és a garamint tartalmazó eluátum-frakciókból a vizet vákuumban történő bepárlással eltávolítjuk, adott esetben a garamint finomszemcsés karboxil-típusú kationcserélő gyantán, híg vizes. 0,08 — 0,50 n, célszerűen 0,12 n ammóniumhidroxid-oldattal újból kromatografáljuk. majd az így kapott anyagot valamely erősen bázisos alkilamino-csoportokat tartalmazó finomszemcséjű anioncserélő gyantán hidroxil-formában megkötjük, a gyantáról ionmentes vízzel szelektíven leoldjuk, majd a garamint tartalmazó frakciókból a vizet vákuumban elpárologtatjuk. 1 ábraoldal A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 784351 - Zrínyi Nyomda