170340. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximid alkalmazásával
9 170340 10 etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos fázist vízzel kétszer mossuk, vízmentes nátrium-szulfáttal vízmentesítjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A desztillációs maradékot (kristályok) petroléterrel mossuk, szűréssel elkülönítjük és szárítjuk, amikor tűkristályos termékként 3,6 g (kitermelés: 92,8%) anyagot kapunk. A termék- olvadáspontja 127-128 C°; [a]fj = -17,9° (c= 1,02, etanol). Elemanalízis a C2s H 26 0 8 N 2 (482,47) képlet alapján: számított: C 62,23%; H5,43%; N5,81%; mért: C 62,21%; H5,40%; N5,81%. 5. példa A Z-Ala-NH2 előállítása 30 ml etilacetát és 40 ml tetrahidrofurán elegyében 4,5 g (20 mM) Z-Ala-OH-t és 3,6 g HONBI-et oldunk, az oldatot jégfürdőben lehűtjük és 4,5 g DCC-et adunk hozzá. Ezután jégfürdőben 30 percen át, majd további 30 percen át szobahőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet. A melléktermékként keletkező diciklohexilkarbamidot szűréssel elkülönítjük, a szűrlethez 20 ml tömény vizes. ammóniaoldatot adunk. Három órán át jégfürdőben keverjük a reakcióelegyet, majd csökkentett nyomáson száraz maradékig desztilláljuk. A desztillációs maradékot 150 ml etilacetátban oldjuk. Az oldatot kétszer, 100—100 ml 1 n sósavval, majd vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfáttal vízmentesítjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. A kristályos desztillációs maradékot etilacetát és petroléter elegyéből kikristályosítjuk, amikor tűkristályos termékként 3,6 g (kitermelés: 81%) súlyú anyagot kapunk. A termék olvadáspontja 128-129 C°. Elemanalízis a CnH14 0 3 N 2 (222,24) képlet alapján számított: C 59,45%; H 6,35%; N 12,60%; mért: C 59,69%; H 6,25%; N 12,50%. 6. példa A Z-Ala-Gly-OBzl előállítása 40 ml etilacetátból és 30 ml tetrahidrofuránból készült elegyben 4,5 g (20 mmólM) Z-Ala-OH-t és 3,6 g HONBI-et oldunk, majd jégfürdőben lehűtjük és 4,5 g DCC-et adunk hozzá. Harminc percen át jégfürdőben, további harminc percen át szobahőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet. A melléktermékként keletkezett diciklohexilkarbamidot szűréssel eltávolítjuk, a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. Az olajos desztillációs maradékot etilacetát és petroléter 1:1 arányú elegyében oldjuk, az oldhatatlan karbamidot szűréssel eltávolítjuk. Csökkentett nyomáson a szűrletet bepároljuk, a desztillációs maradékot 40 ml dioxánban oldjuk, az oldathoz 6,8 g (20 mmólM) H-Gly-OBzl-p-toluolszulfonátot és 3,0 ml trietilamint adunk. 4 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A desztillációs maradékot 150 ml etilacetátban oldjuk, az oldatot vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és 1 n sósavval mossuk. A sósavas mosást követő vizes mosás után az oldatot vízmentes nátrium-szulfáttal vízmentesítjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. A kristályos desztillációs maradékot etilacetát és petroléter elegyéb ől kikristályosítjuk, amikor tűkristályos anyagként 6,62 g (kitermelés: 92,0%) súlyú, 109-110 C° olvadáspontú terméket kapunk (az irodalomban megadott olvadáspont 111 C°). 5 Elemanalízis a C^ H22 OsN 2 képlet alapján: számított: C 64,85%; H 5,99%; N 7,56% mért C 64,79%; H5,93%; N 7,61%. 7. példa 10 A Z-Val-Val-OBzl előállítása 30 ml etilacetát és 30 ml tetrahidrofurán elegyében 5,0 g (20 mmólM) Z-Val-OH-t és 3,6 g HONBI-et oldunk. Az oldatot jégfürdőben lehűtjük és 4,5 g DCC-et adunk hozzá. 0 C° hőmérsékleten 30 15 percen át, majd szobahőmérsékleten egy órán át keverjük a reakcióelegyet. A melléktermékként keletkező karbamidot szűréssel elkülönítjük, a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A desztillációs maradékot 40 ml tetrahidrofuránban oldjuk, az ol-20 datot jégfürdőben lehűtjük és 7,6 g (20 mmólM) H-Val-OBzl-p-toluolszulfonátot és 2,9 ml trietilamint adunk hozzá. 30 percen át jégfürdőben keverjük az oldatot, majd a keverést 8 órán át szobahőmérsékleten folytatjuk és ezt követően csökkentett 25 nyomáson bepároljuk. A desztillációs maradékot 150 ml etilacetátban oldjuk, az oldatot 4%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd 1 n sósavval mossuk. A sósavas, mosást követő vizes mosás után nátrium-szulfáttal vízmentesítjük az elegyet és csök-30 kentett nyomáson desztilláljuk. Az olajos desztillációs maradékhoz petrolétert adunk, majd lehűtjük, amikor kristályosodási folyamat indul meg. A kristályos terméket etilacetát és petroléter elegyéből kikristályosítjuk, amikor 8,10 g (kitermelés: 92%) tűkristályos 35 anyagot kapunk. A termék olvadáspontja 114-116 C° (irodalmi adat: 116 C°); [a]ft = -44,2° (c = 2,06, metanolban); irodalmi érték —44,3°. Elemanalízis a C2S H 32 0 5 N 2 képlet alapján: számított: C 68,16%; H 7,32%; N 6,36%; 40 mért: C 67,76%; H 7,08%; N 6,47%. 8. példa A Z-Gly-Phe-Gly-OEt előállítása (Anderson—Young) 45 a) A Z-Gly-Phe—OH kiindulási vegyület előállítása 100 ml tetrahidrofuránban 8,4 g (40 mmólM) Z-Gly-OH-t oldunk, az oldathoz 7,2 g HONBI-et és jégfürdőben lehűtve a reakcióelegyet, 9 g DCC-et 50 adunk. 30 percen át 0 C°, majd további 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. A melléktermékként keletkező diciklohexilkarbamidot szűréssel elkülönítjük, a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. 55 80 ml 40% vizet tartalmazó DMF-ben 7,4 g (45 mmólM) H-Phe-OH-t oldunk, az oldathoz 3,7 g nátrium-hidrogén-karbonátot adunk. Ehhez az oldathoz hozzáadjuk a fentiek szerint készített Z—Gly— ONBI-et, majd hűtés közben 1 órán át és szobahőm ér-60 sékleten 4 órán át keverjük a reakcióelegyet. Ezután 150 ml etilacetátot és 50 ml 1 n sósavat adunk a reakció elegyhez és 100 ml telített vizes nátriumklorid oldattal mossuk. A vizes fázist elkülönítjük és kétszer, 80—80 ml etilacetáttal extraháljuk. Az egye-65 sített szerves oldószeres fázist 100 ml 1 n sósavval, 5
