170264. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az S-adenozil-L-metionin szulfonsavsóinak előállítására
170264 21 22 nem tette eddig lehetővé a SAM-mal bármiféle farmakológiai vagy klinikai vizsgálat lefolytatását, így nem került sor ez ideig a SAM alkalmazására az embergyógyászatban. Csak a találmány szerinti SAM-sók előállítása után - mely sók szobahőmérsékleten gyakorlatilag korlátlan időn át stabilak - vált lehetővé szisztematikus farmakológiai és klinikai vizsgálatok elvégzése. Ezek a vizsgalatok eredményeképpen megállapítható, hogy a találmány szerinti új SAM-sók gyógyászati hatása teljesen meglepő mind jellegét, mind intenzitását illetően. A találmány szerinti új SAM-sókkal végzett rendkívül nagy számú farmakológiai és klinikai kísérleti eredményből az alábbiakban csak néhány olyan részt ismertetünk, amely véleményünk szerint szakemberek számára világosan jelzi az új vegyületek alapvető jellemzőit és fő felhasználási területeit az embergyógyászatban. Az egyszerűség kedvéért a továbbiakban egyszerűen „SAM-só" kifejezéssel fogjuk jelölni a találmány szerinti új sókat, tekintettel arra, hogy az egyes sók felhasználási területe teljes mértékben megegyezik egymással, más szavakkal, nem játszik szerepet a felhasználás vonatkozásában az anion minősége. A farmakológiai és klinikai eredmények megadásánál a szervezetbe juttatott sót mindig „SAM" kifejezéssel illetjük és mennyiségét a benne levő SAM-tartalom formájában adjuk meg. Szakember számára érthető tehát, hogy az alábbi adatok bármely, a találmány értelmében előállitött SAM-sóra vonatkoznak. Toxicitás A találmány szerinti eljárással előállított új SAM-sók a toxicitási vizsgálatok során mentesnek bizonyultak akut toxicitástól, krónikus toxicitástól, helyi intolerancia kiváltásától és szekunder káros hatásoktól. Közelebbről, az egereken mérhető DL50 érték orális beadás esetén nagyobb, mint 2,5 g/kg, míg intraperitoneális beadás esetén nagyobb, mint l,0i g/kg. A SAM-sóval szemben mutatott tolerancia és krónikus toxicitás vizsgálatát Wistar és Sprague-Dowley törzsbe tartozó patkányokon végeztük 12 hónapon át napi 4—8 mg/kg SAM-sót juttatva a kísérleti állatok szervezetébe. A kezelési periódus végén nem volt tapasztalható patológiás elváltozás a különböző szervekben és egyéb testrészekben.. Az embriótoxicitás vizsgálatát nyulakori és patkányokon végeztük. Még igen nagy dózisokban, például a maximális terápiás dózisnál közelítőleg tízszer nagyobb dózisban beadva a SAM-sót sem tapasztaltunk teratogen hatást vagy bármiféle elváltozást az embriókban vagy a kifejlett magzatokban. A SAM-só beadagolása legfeljebb 0,5-0,10 mg/ml dózisban emberi limfociták vagy egerek májsejtjemek életben tartott tenyészetébe nem okoz semmiféle változást a sejtrészekre vonatkozó csírázási indexben. A SAM-sót legfeljebb 16 mg/kg dózisban intravénásán beadva nem észlelhető semmiféle pirogén (lázkeltő) manifesztáció nyulakon. A SAM-sót nyulaknak és macskáknak 16 mg/kg dózisban vénásan beadva nem észlelhető semmiféle változás a karotid nyomásban, a szív és légzésfrekvenciában vagy az elektrokardiogrammban. Az intramuszkuláris injekcióval (még 180 napon át ismétlődő beadások esetében is) a nyúl marginális fülvénájába beadott injekcióval szemben mutatott helyi tolerancia kiváló, vagyis a SAM-só tökéletesen tolerálható. 5 Emberek, közelebbről mindkét nembeli fiatal és egészséges önkéntesek (átlagos testsúlyuk 70 kg) esetében 5—150 mg nagyságú SAM-só dózis gyors intravénás módszerrel vagy vénaöbh'téses módszerrel történő beadása során a minimális és maximális 10 vérnyomás, a pulzus és a légzésfrekvencia a beadást követő 1., 5., 15., 20., 30. és 60. percben, továbbá második, harmadik, hatodik, nyolcadik, tizedik, tizenkettedik és huszonnegyedik órában egyidejűleg elvégzett vizsgálatok tanúsága szerint nem tapasztalható 15 eltérés a normális értékektől. Ä beadást követő harmincadik másodpercben, illetve 1., 2., 3., 5., 101 és 20. percben az elektrokardiogramban nem látható semmiféle változás a PO,-tartományban és az ST-székcióban, továbbá extraszisztolé vagy más káros elváltozás sem 20 észlelhető. A vérképző rendszer, valamint à máj és a vese működésében sem észlelhető a normálistól olyan eltérés, ami statisztikailag jelentős lenne. Farmakológiai vizsgálatok Ismételtért kihangsúlyozzuk, hogy a továbbiakban 25 valahányszor SAM beadásáról beszélünk, akkor ez alatt bármely, a találmány szerinti eljárással előállítható egyszerű vagy kettős SAM-só beadását értjük, minthogy ezeknek a sóknak a hatása teljes mértékben egyező. Annak érdekében, hogy egyetlen referencia-30 paramétert használjunk, mindig a különhöcő sók SAM-tartalmát adjuk meg. Metilcsoportban C14 szénatomot hordozó S-adenozil-metionint készítettünk annak érdekében, hogy indikatív jelleggel meghatározzuk, hogyan oszlik el a 35 SAM a különböző testszövetekben. A termék eloszlását patkányokon tanulmányoztuk 4,2 mg/kg dózis intravénás beadása útján. Ez a dózis megközelítőleg10 /jÇi radioaktív terméknek felel meg. A termék fajlagos radioaktivitása 68 mCi/ínillimól értékű volt. Ezzel a 40 kísérlettel párhuzamosán egereken autorâdiograf vizsgálatot végeztünk. A két kísérlet eredményei azt bizonyították, hogy a SAM igert gyorsán eloszlik az összes vizsgált szövetben. Példaképpen néhány vizsgált szervre vonatkozó 45 adatot adunk meg az alábbiakban. Ezek az oldatok a SAM-nak patkány bizonyos szöveteiben történő eloszlására vonatkoznak. A táblázatbari megadott, értékek jug/g dimenziójúak. 50 55 60 Szövet, 15 perc 1 óra 4 óra ' 8 óra 24Óra máj 1,7 3,0 l Se;-,' •; 5;6 ..: ï/5 ' 7 '; mellék•r/.-i^ •• vese 1,9 Z 3,4..; v-4,8,..,; ,, 4,5:^:" ••.-.. 4,%^ lép 1,3 rí ,2, , 3,5 ; •'.m-ry -;;T2,8^ hipofízis 2,3 '-2,5 :. 8>0: : •y-*,5y ,;::4,2-; hippta. -\:.v, lamusz 0,3 0,65 1,0 Iß : 1& bőr 0,25 0,45 0,75 8,5 9sA • vérplazma 7,5 2,1 -2,3 '.-'if).':. í,l-Ezekből az adatokból tobábbá azt a következtetést vontuk le, hogy az új SAM-sók metilcsoportokat adnak át minden olyan szövetnek, arnelyriek métiltranszferáz aktivitása van. Más szavakkal, az adatokból 65 arra következtetünk, hogy az új SAM-sók képesek 11
