170264. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az S-adenozil-L-metionin szulfonsavsóinak előállítására
170264 3 4 fonsav (C2 H 5 S0 3 H), 1-n-dodekánszulfonsáv (Cn H2S S0 3 H), 1-n-oktedekánszulfonsav (C 18 H37S0 3 H), 2-klór-etánszulfonsav (CIC2H4SO3H), 2-brómetánszulfonsav (BrC2 H4S0 3 H), 2-hidroxi-etánszulfonsav (HOC2H4SO3H), 3-hidroxi-propánszulfonsav (HOC3 H 6 S0 3 H), D-, L vagy DL-10-kámforszulfonsav (C10 H,7 OSO3H), D-, L- vagy DL-3-bróm-kámfor-10-szulfonsav (Ci0 H 16 BrOS0 3 H) és ciszteinsav (C 3 H6NSO3H). Az új sók közé tartoznak továbbá a SAM • 3 RSO3H általános képlettel jellemezhető sók, ahol RSO3H egyike az alábbi savaknak: benzolszulfonsav (C6H 5 S0 3 H), 4-klór benzolszulfonsav (C1C 6 H4S03 H), 2-mezitil-benzolszulfonsav [(CH 3 ) 3 C 6 H 2 S03 H], 4-bifenüszulfonsav (Cl2 H 10 S0 3 H), 1-naftalinszulfonsav (Ci0 H 7 SO 3 H), 2-naftalinszulfonsav (C10 H7 S0 3 H), 5-szulfo-szalicilsav (C 7 H s 0 3 S0 3 H) és 4-acetil-benzolszulfonsav (C8 H 7 OS0 3 H). Az új sók közé tartoznak továbbá a SAM alábbi savakkal alkotott sói: 1,2-etándiszulfonsav, a só a SAM • 2 C2H4(S03H) 2 képletnek felel meg; 2-benzoldiszulfonsav, a só a SAM • 1,5 C6H4(S0 3 ,H) 2 képletnek felel meg; és a kondrotinkénsav (mükopoliszacharid), a só a SAM -4 Ci4 H 2 j NOî4 S képletnek felel meg. Végül az új sók közé tartoznak a kénsawal és a fentiekben felsorolt szulfonsavak valamelyikével alkotott kettős sók, amelyek az alábbi általános képletek valamelyikének felel meg: SAM" • HSO4 "• H 2S0 4 • RSO3H vagy SAM" • HSO4 "• H 2S0 4 • 2RS0 3 H ahol az általános képletekben RS03 H megfelel a fentiekben említett szulfonsavak valamelyikének vagy etnádiszulfonsav, 2-benzoldiszulfonsav és kondroitinkénsav esetében e savak ekvivalens mennyiségének. Mint említettük, a SAM ezen új sóinak nagy technikai jelentősége abban áll, hogy száraz állapotban legfeljebb 45 °C-on időben korlátlan ideig stabilak, így az új sók bármelyikének SAM-tartalma változatlan marad még abban az esetben is, ha száraz állapotban a sókat 30 napon keresztül 45 °C-on tartjuk. A SAM ez ideig ismert két legstabilabb sója, a klorid és a szulfát esetében száraz állapotban 30 napon át ,45 °G-ön történő tárolás után az eredeti SAM-tartalom 209^a, illetve 50%-a mutatható ki, míg ugyanezen a hőmérsékleten végzett 60 napos tárolás után a klorid esetében a SAM teljesen elbomlik, míg a szulfát mindössze 5% elbomlatlan SAM-ot tartalmaz. A SAM említett új sóit a találmány értelmében az alábbi reakciólépések sorozatában állítjuk elő: '(.1) legalább 4 g/liter S-adeiiozil-metionint tartalmazó vizes oldatból 3-metil-4-nÍtro-l-(4-nitro-fenil)-2-pirazolin-5-on (továbbiakban: pikrolonsav) telített vizes oldatával vagy ugyanezen vegyület valamilyen vízoldható szerves oldószerrel, éspedig egy 1—4 szénatomos alkanoM, di(l—4 szénatomos)-alkil-ketonnal, etil-acetáttál, tetrahidrofuránnal, 2-metoxi-etanollal, 2-etoxi-etanollal, dioxánnal vagy dimetil-formamiddal készült telített oldatával az S-adenozil-metionint kicsapjuk, (2) az előző lépésben kapott csapadékot feloldjuk metánszulfonsav, etánszulfonsav, 1-n-dodekánszulfonsav, 1-n-oktadekánszulfonsav, 2-klór-etánszulfonsav, 2-brórn-etánszurfonsav, 2-hidroxi-etinszulfonsav, 3-hidroxi-propánszulfonsav, D-, L- vagy Dl-10-kámfor-, szulfonsav, í>, L- vagy DL-3-bróm-kámfor-lO-szulfon-sav, ciszteinsav, benzolszulfonsav, 4-klór-benzolszulfonsav, 2-mezitil-benzolszulfonsav-, 4-bifenilszulfonsav, írnaftalinszulfonsav, 2-naftalinszulfonsav, 5-szulfo-szalicilsav, 4-acetil-benzolszulfonsav, 1,2-etándi-5 szulfonsav, 2-benzoldiszulfonsav vagy kondroitinkénsav 0,25 és 1,5 közötti normalitású, valamely 1-4 szénatomos alkanollal vagy (1—4 szénatomos)-alkoxt (1-4 szénatomos)-alkanollal készült oldatában vagy pedig valamelyik említett szulfonsav és kénsav mind-10 két savra nézve 0,05 és 0,2 közötti normalitású, víz és valamilyen vízzel részben elegyedő oldószer, célszerűen metil-etil-keton, metil-izobutil-keton, n-butanol vagy izobutanol azonos térfogatarányú elegyével készült oldatában, majd 15 (3) az előző lépésben kapott oldatból az S-adenozil-metionin egyszerű szulfonsavsóját vagy kettős sóját az előző lépésben használt oldószerrel tökéletesen elegyedő szerves oldószer adagolása után kicsapjuk, és kívánt esetben egy így kapott egyszerű szulfonsavsót 20 kénsawal képzett kettős sóvá alakítunk. Az egyszerű szulfonsavsók kívánt esetben végzett átalakítását az alábbiakban ismertetett módon foganatosíthatjuk: A kapott egyszerű szulfonsavsót kiszűrése után 25 feloldjuk olyan elegyben, amely azonos térfogatrésznyi vízből és egy vízzel részben elegyedő oldószerből, célszerűen metil-etil-ketonból, metü-izobutüketonból, n-butanolból vagy izobutanolból áll és az egyszerű szulfonsavsóban levő szulfonsavra, valamint 30 kénsavra nézve egyaránt 0,05 és 0,2 közötti normalitású, majd a szerves fázist elválasztjuk és a vizes fázisból a kettős sót aceton, metanol, etanol vagy propanol adagolása útján kicsapjuk. Az utóbbi alkoholokat célszerűen négyszeres és nyolcszoros közötti 35 térfogatmennyiségben használjuk. A kettős sók kívánt esetben előállíthatók továbbá úgy is, hogy a (3) lépésben kapott kettős sót a benne levő szulfonsavra és kénsavra nézve egyaránt 0,05 és 0,2 közötti normalitású, valamely 1-4 szénatomos 40 alkanollal vagy (1—4 szénatomos)-alkoxi-(l-4 szénatomos)-alkanollal készült oldatban újra oldjuk, majd az így kapott oldatból a kettős sót az oldáshoz használt alkohollal tökéletesen elegyedő szerves oldószerrel, célszerűen benzollal, toluollal, dietil-éterrel, 45 diizopropil-éterrel, acetonnal, metil-etil-ketonnal, metil-izobutil-ketonnal, etil-acetáttal, metil-acetáttal, tetrahidrofuránnal vagy kloroformmal újra kicsapjuk. A találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagként használt S-adenozil-metionin-oldat előállítására 50 lehetséges egyik alternatíva szerint úgy járunk el, hogy alkalmas körülmények között [Schlenk: Enzymologia, 29, 283 (1965)] metionin adagolása útján SAM-ban feldúsított élesztőgombát (például Saccharomyces cervisiae, Torulopsis utilis vagy Candida 55 utilis gombát) etil-acetáttal, továbbá 0,1 és 0,5 közötti normalitású, előnyösen 0,35 n kénsawal kezelünk úgy, hogy a sejtek bomlása bekövetkezzék és a sejtekben levő SAM gyakorlatilag 100%-a oldatba menjen. A nedves sejtek súlyára vonatkoztatva a vizes 60 kénsavoldat és az etil-acetát arányát előnyösen 1/20 és 1/5 arányértékek között, a kezelés időtartamát pedig 15 perc és 45 perc között, előnyösen 30 percre választjuk meg. A sejtek, a vizes kénsavoldat és az etil-acetát 65 keverékéhez ezután kénsavat adunk, majd az így 1 2
