170225. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pepszinosztreptin proteáz- inhibitorok előállítására

170225 13 14 ramulosus IFO 12 812 (SP 5100) törzzsel inokulálunk. Ezután rotációs rázógépen 4 napon át inkubáljuk 28 C°-on, majd meghatározzuk a keletkező kultúra pepszinosztreptin tartalmát. A kapott eredményeket az alábbi 5. táblázatban adjuk meg. 5. táblázat Valin és N-acilvalin adagolásának hatása a pepszinosztreptin felhalmozódására Adalékanyag (%) Felhalmozódott pepszinosztreptin (mg/ml) L-valin D-valin N-acetil-DL-valin N-benzoil-DL 10 valin 4,0 2,0 2,0 2,0 2,0 0,84 1,03 0,98 0,95 0,80 Adalékanyag (%) Felhalmozódott pepszinosztreptin (mg/ml) DL-valin 0,25 0,5 1,0 2,0 0,13 0,28 0,42 0,67 0,99 4. példa Streptomyces citricolor Ferm-P-No.393 törzset termelünk 4 napon keresztül 28 C°-on a 3. példa szerinti módon, majd egymástól függetlenül meghatározzuk a 2. példában leírt kazein-pepszin-agarlemezes módszerrel a pepszinosztreptin és pepszinosztreptinmetilészter felhalmozódott mennyiségét. A kapott eredményeket az alábbi 6. táblázatban adjuk meg. 6. táblázat Valin és N-acilvalin adagolásának hatása a pepszinosztreptin és pepszinosztreptin-metilészter felhalmozódására Adalékanyag Felhalmozódott pepszinosztreptin Felhalmozódott pepszinosztreptin-Adalékanyag (Mg/ml) metilészter (ug/ml) _ 8,0 2,1 DL-valin 2% 60 15 L-valin 2% 63 15 D-valin 2% 59 14 N-acetil-DL-valin 2% 41 12 N-benzoil-DL-valin 2% 39 10 5. példa 200 térfogatrész térfogatú fermentorban levő 50 térfogatrész 7,0 pH-értékü folyékony táptalajt, amely 5% dextrint, 3% szójalisztet, 0,7% peptont, 0,5% kalcium-karbonátot, 0,05% ferroszulfátot, 0,05% mangánszulfátot, 0,05% magnézium-szulfátot, 0,05% dikálium-hidrogén-foszfátot és különböző koncentrációban propionsavat tartalmaz, Streptomyces ramulosus IFO 12 812 vagy Streptomyces catenulae IFO 12 848 (ATCC 12 476) törzzsel inokulálunk, majd 4 napon át inkubáljuk 28 C°-on. Ezután megmérjük a keletkező kultúrában levő P-pepszinosztreptin felhalmozódott mennyiségét. A kapott eredményeket az alábbi 7. táblázatban adjuk meg. 7. táblázat Propionsav adagolásának hatása a P-pepszinosztreptin felhalmozódására Propionsav kon- Felhalmozódott P-pepszinosztreptin centráció(%) (mg/ml) IFO 12 812 IFO 12 848 0 0,05 0,02 0,5 0,31 0,10 1,0 0,56 0,19 2,0 0,80 0,28 3,0 0,68 0,26 40 45 50 60 65 6. példa 2 db 2000 térfogatrész térfogatú lombikban levő egyenként 500 térfogatrész 7,0 pH-értékű táptalajt, amely 3% glükózt, 2% kukoricalekvárt, o3% dikálium-hidrogén-foszfátot, 0,02% ammónium-szulfátot, 0,05% magnézium-szulfátot és 0,5% kalciumkarbonátot tartalmaz, Streptomyces ramulosus IFO 12 812 törzzsel inokulálunk. A lombikokat rázógépen 2 napon át inkubáljuk 28 C°-on, így 1000 térfogatrész kultúrát kapunk. Ezt az oltókultúrát 50 000 térfogatrész térfogatú 30 000 térfogatrész fenti összetételű táptalajt tartalmazó fermentorba visszük át, majd levegőztetés és keverés közben 2 napon át 28 C°-on inkubáljuk. A keletkező kultúrát ezután 2 000 000 térfogatrész térfogatú 1 000 000 térfogatrész 7,0 pH-értékű, 5% dextrint, 3% szójalisztet, 0,7% peptont, 0,5% kalcium-karbonátot, 0,05% ferroszulfátot, 0,05% mangánszulfátot, 0,05% magnézium-szulfátot, 0,05% dikálium-hidrogén-foszfátot és 0,5% nátriumpropionátot (ez 0,39% proionsavnak felel meg) tartalmazó fermentorba visszük át. Ezután hozzáadunk körülbelül 500 súlyrész habzásgátló szert, az inokulált közeget levegőztetés és keverés közben 28 C°-on inkubáljuk. 16 óra múlva hozzáadunk 100 000 térfogatrész 15%-os vizes nátriumpropionát-oldatot, amelynek pH-ját előzőleg 7,0-ra állítottuk be és sterilizáltunk, ezután a közeget levegőztetés és keverés közben 74 órán keresztül tovább inkubáljuk. A 7