170134. lajstromszámú szabadalom • Javított eljárás vinblasztin-dez-n-metil-vinblasztin és vinkrisztin tisztítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1974. X. 24. (EI-569) Elsőbbsége: Amerikai Egyesült Államok, 1973. X. 24. (409. 225) Közzététel napja: 1976. XI. 27. Megjelent: 1978. II.8. 170134 Nemzetközi osztályozás: C 07 D 519/04 Feltaláló: Jones William Eugene, vegyész, Indianapolis, Indiana, Amerikai Egyesült Államok Tulajdonos: Eli Lilly and Company, Indianapolis, Indiana, Amerikai Egyesült Államok Javított eljárás vinblasztin, dez-N-metil-vinblasztin és vinkrisztin tisztítására A találmány tárgya javított eljárás vinblasztin, dez-N-metil-vinblasztin- és vinkrisztin-alkaloidok tisztítására. Az alkaloidokat a Vinca rosea növény leveleinek savas,extrakciójávai nyerik oly mádon, hogy a savas oldatot közömbösítik, a dimer alkaloidokat ebből az oldatból szerves oldószerrel kiextrahálják, majd az extrahált alkaloidokat kromatografálják gélkiszoritásos kromatográfiával. Ezután a dimer alkaloidokat szulfát sóik alakjában kicsapják, végül» a dimer alkaloidokat nagynyomású kromátográfiával választják szét. A vinblasztin /vinkaleukoblasztin vagy VLB/ Beer és munkatársai /3 o97 137 sz. Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leirás/ szerint kinyerhető" a Vinca rosea növény leveleinek etanollal és ecetsavval végzett együttes extrakciójávai. Az extraktot ezután sósavval megsavanyitják, a vizes savas oldatot benzollal extrahálják, majd az alkaloidot tartalmazó benzolos extraktot aluminiumoxidon végzett pH-gradens eluciós kromatográfiásak vetik alá. Egy javított eljárás kapcsán /Svoboda, 3 225 o3o sz. Amerikai Egyesült Allamok-beli szabadalmi leirás/ a vinblasztint és kisérő alkaloidáját a leurozint ugy állitják elő, hogy a Vinca rosea növény leveleit borkősav és benzol elegyével extrahálják. A benzolos réteget közömbösitik. A nem oldódó alkaloidákat benzollal kiextrahálják. A benzolos extraktot ezután kromatográfiás szétválasztási eljárásnak vetik alá, melynek kapcsán a leurozin és a vinblasztin sikeresen kinverhe. tő. A vinkrisztint /a leurokrisztint/ a kisérő többi dimer vinka-alkaloidtól ugy választják el, hogy a Vinca rosea leveleket benzol és borkősav elegyével extrahálják. /Svoboda, 3 225 o3o sz. Amerikai Egyesült Államok-beli 170134 10 15 20 25 30 szabadalmi leirás/. Az anyalugokat - amelyeket a fenti két módszer valamelyike szerint előállitott vinblasztin-szulfát kikristályositása után kapnak - citromsavas extrakciónak vetik alá, először 4,4-es pH értéken, majd 7,o-es pH értéken. Az alkaloidokat ugy nyerik ki, hogy a magasabb pH értéken dezaktivált aluminiumoxidon kromatográfálnak, majd a benzol eluenst elpárologtatják. A vinkrisztin a vinrozidin /leurozidin/ után eluálható. A három fő dimer, rák-elleni Vinca rosea alkaloida: a vinblasztin, vinkrisztin és a leurozin tisztitására ismeretes továbbá a 16o 967 sz. magyar szabadalmi leirás. A Vinca leveleket vizes metanollal extrahálják, és a kiextrahált dimer alkaloidokat sav hozzáadása után sav-addiclós sók alakjában, célszerűen szulfát alakban, oldatba viszik. A megsavanyitott extraktot ezután benzollal extrahálják és a benzolos extráitokat eltávolítják. A savas rétegek ezután meglugositíják, és az alkaloidokat benzollal extrahálják. Ezt a benzolos extraktot szárazra párolják és a kapott alkaloidokat lo 'Jt-os kénsav oldattal a megfelelő szulfát-sóvá alakitják. Ily módon a három dimer alkaloid kristályos szulfát-sójának elegye nyerhető, melyet kromatográfiás utón szét lehet választani, metilén-klorid és kloroform eluáló folyadékok alkalmazásával. Más módszer szerint az alkaloid bázisokat közvetlenül szét lehet választani kromatográfiás utón anélkül, hogy előbb szulfát-sóvá kellene őket alakítani. A 154 715 sz. magyar szabadalmi leirás szerint a Vinca leveleket ammónium-hidroxiddal, majd ezután toluollal kezelik. A toluolos extraktumot sósavval kezelik. A megmaradt alkaloid elegyet etilén-dikloriddal extrahálják 9-es pH értéken. Ezt az alkaloid frakciót ezután neutrális aluminiumoxidon kromatograxaljak.