170113. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagytisztaságú bakteriális alfa- amiláz és/vagy semleges proteáz, valamint lúgos proteáz előállítására
9 170113 10 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1./ Eljárás nagytisztaságu bakteriális alfa-amiláz és/vagy neutrális proteáz előállítására, azzal jellemezve, hogy a Bacillus subtilis törzs /a Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében deponálva 63 letéti számon/ fermentáció jávai előállított, alfa-amilázt és neutrális proteázt tartalmazó fermentléből az enzimeket ezabályozott porozitású, ionogén szubsztituenst tartalmazó polikondenzációs fenolgyanta szorbensen enyhén savanyu pH-n megkötjük, a kötésnél alkalmazott pH értéken magasabb pH érréken eluáljuk, az eluátumot kivánt esetben cellulóz alapú ioncserélő alkalmazásával tisztit juk, az alfaamilázt és neutrális proteázt fehérjekicsapó szerekkel, kivánt esetben frakcionáltan kicsapjuk és a csapadékot szűrjük, majd szárítjuk és adott esetben ujraoldjuk és tisztítjuk. /Elsőbbség: 1972. szeptember 22./ 2./ Eljárás nagytisztaságu bakteriális lu-. gos proteáz előállítására, azzal jellemezve, hogy a Bacillus subtilis törzs /A Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében deponálva ool34 letéti számon/ fermentációjával előállított, lúgos proteázt tartalmazó fermentléből az enzimet szabályozott porozitású, ionogén szubsztituenst tartalmazó polikondenzációs fenoigyanta szorbensen enyhén savanyu pH-n megkötjük, a kötésnél alkalmazott pH értéknél magasabb pH értéken eluáljuk, az eluátumot kivánt esetben cellulóz alapu ioncserélő alkalmazásával tisztítjuk, a lúgos proteázt fehérjekicsapó szerekkel kicsapjuk, a csapadékot szűrjük, majd szárítjuk, és adott esetben ujraoldjuk és tisztítjuk. /Elsőbbség: 1975. április 1./ 3./ Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítás! módja, azzal jellemezve, hogy az enzimeket sejtmentesitett fermentléből pH 4,5-6,5 között, előnyösen pH 5,2-n o,l mólos foszfát pufferral pH 4,5-6,5-re pufferolt gyantán 0°C és 2o°C között, előnyösen +4 C°-on kötjük meg. /Elsőbbség: 1972. szeptember 22./ 4./ Az 1. és 3. igénypontok szerinti eljárás foganatosítás! módja, azzal jellemezve, hogy a szűrt fermentlé kalcium tartalmát o,l-8 mg/ml értékre állítjuk be. /Elsőbbség: 1972. szeptember 22./ 5./ Az 1., 3. és 4. igénypontok szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy az eluclót 7,2-lo,o pH-n, előnyösen pH lo,o-en o,3 mól ionerősség mellett hajtjuk végre. /Elsőbbség: 1972. szeptember 22./ 6./ Az 1., 3., 4. és 5. igénypontok sze-10 15 20 25 30 35 40 45 rlnti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy a megkötést oszlopon, vagy a gyanta bekeverésével végezzük el. /Elsőbbség: 1972. szeptember 22./ 7./ Az 1., 3., 4., 5. és 6. igénypontok szerinti eljárás foganatositási módja pigmentesitésre azzal jellemezve, hogy az ioncserélő oszlopról kapott alfa-amiláz és neutrális proteáz tartalmú eluátumot és/ /vagy az ebbnfl szerves oldószeres kicsapással kapott enzimkeverék desztillált vízzel készitett oldatát célszerűen pH 8,0-8,5 értékre állítjuk be, átengedjük OH-ciklusba vitt és vizzel kimosott cellulóz alapú anioncserélőn, előnyösen dietilamino-etilcellulózon, az átfolyó oldathoz o,2-2 <& kalciumkloridot, majd azonos térfogatú etilalkoholt adunk és a kiváló alfa-amiláz tartalmú csapadékot elkülönítjük, majd a felüluszó folyadékból további etilalkohol hozzáadásával 66-80 térfogat % kiesapószér töménység határok között a semleges proteázt csapjuk ki és különitjük el. /Elsőbbség: 1972. szeptember 22./ 8./ A 2. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy az enzimet sejtmentesített fermentléből pH 4,5-6,5 között, előnyösen pH 5,2-n o,l mólos foszfát pufférrel pH 4,5-6,5-re pufferolt gyantán 0 C° és 2o C° között, előnyösen +4 Cö -on adszorbeáltatjuk. /Elsőbbség: 1975. április 1./ 9./ A 2. és 8. igénypontok szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy a szűrt fermentlé kalciumtartalmát 0,1-8 mg/ml értékre állítjuk be. /Elsőbbség: 1975. április 1./ lo./ A 2., 8. és 9. igénypontok szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy az eluciót 7,2-ló,o pH-n, előnyösen pH lo,o-en o,3 mól ionerősség mellett hajtjuk végre. /Elsőbbség: 1975. április 1./ 11./ A 2., 8., 9. és lo. igénypontok szerinti eljárás foganatositási módja, azzal j ellemezve, hogy a megkötést oszlopban vagy a gyanta bekeverésével végezzük el. /Elsőbbség: 1975. április 1./ 12./ A 2., 8., 9., lo. és 11. igénypontok szerinti eljárás foganatositási módja pigmentmentesitésre azzal jellemezve, hogy az ioncserélő oszlopról kapott lúgos proteáz tartalmú eluátumot és/vagy az ebből szerves oldószeres kicsapással kapott enzim desztillált vizzel készített oldatát célszerűen pH 8,0-8,5 értékre állítjuk be, átengedjük OH ciklusba vitt és vizzel kimosott cellulóz alapú anioncserélőm, előnyösen dietilamino-etilcellulózon, az átfolyó oldathoz o,2-2 % kaleiumkloridot, majd kétszeres térfogatú etilalkoholt adunk, a kiváló lúgos proteáz tartalmú csapadékot elkülönítjük és szárítjuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 770200, OTH, Budapest
