170110. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai eszköz glükóz vizeletben való kimutatására
170110 1. táblázat Puffer /pH 6,0/ loo-looo mg# glükóz25o mg# acetecet-Reakció csökzal adott szin sav és 2ooo mg# kenés 3o nap /vizeletben/ -hidroxi-vajsav múlva zavara hatása 6o°-nál /vizeletben/ MES, o,5 M /l. példa/ világoszöld-kékesfekete nincs zavarás gyakorlatilag nincs csökkenés Foszfát, 0,25 M világoszöld-szürkésmérsékelt nagyon erős zöld zavarás csökkenés Citrát, o,25 M világoszöld-szürkésmérsékelt erős csökkenés zöld zavarás Citrát, 0,5 M világoszöld-sötétzöld mérsékelt zavarás erős csökkenés Tris-citrát, világoszöld-zöld csekély zavarás nagyon erős 0,5 M csökkenés Imidazol, o,25 M világoszöld-szürkészöld erős zavarás erős csökkenés 3-Amino-piridin, zöldessárga-világoscsekély zavarás nincs reakció o,5 M zöld Malonát, o,5 M szürkészöld-sötétzöldmérsékelt zavarás erős csökkenés Maleát, 0,125 M világoszöld-szürkésmérsékelt zavarás mérsékelt csök' zöld kenés Plrofoszfát, o,25 világoszöld-sötétzöld mérsékelt zavarás nagyon erős M csökkenés összehasonlítás pH 5-tel: Citrát, o,25 M sötétzöld-kékesfekete erős zavarás kis csökkenés Mint a táblázatból látható, csak a MES-pufférrel állithatók elő minden tekintetben optimális tesztpapirok. A többi használatos vagy nem használatos pufferanyaggal olyan tesztpapirokat kapunk, melyek részben az acetecetsav és hidroxi-vajsav erős zavaró hatását mutatják /azaz ketoacidózis esetében/, ezenfelül kevésbé érzékenyek és/vagy kevésbé stabilak. A találmány szerint használt. MES-puffert 25-75 mit, előnyösen 5o mM koncentrációban alkalmazzuk az impregnálőoldat loo ml-éhez. Az 5,8-6,2, előnyösen 6,0 pH-értéket ugy állítjuk be, hogy a 2-/N-morfolino/-etánszulfonsav vizes szuszpenziójához' szükséges mennyiségű tömény nátronlúgot adunk. A kivánt pH-tartományban homogén oldat képződik. Glükóz-oxidáz, peroxidáz és indikátor /előnyösen o-toluidin/ szokásos koncentrációin kivül segédanyagokat, mint oldódást elősegitő reagenseket /például polivinil-pirrolidon vagy polietilénglikol/ és nedvesitőszereket /például nátrium-lauroil-szarkozinát vagy nátrium-lauril-szulfát/ is használhatunk a tesztpapirok előállításához. Célszerű az oldathoz sárga festékanyagot /például tartrazin vagy naftolsárga S/ is hozzáadni a szinátcsapás élességének fokozása céljából. Szivóképes hordozókként mindenekelőtt szűrópapirok jönnek tekintetbe, de cellulóz- vagy műanyag-rostok és -filcek is használhatók. Az uj diagnosztikai eszköz előnyben részesített kiviteli alakjának előállításához szivóképes hordozót, előnyösen, szürőpapirt impregnálunk a fent megadott alkotórészeket tartalmazó oldattal, majd a papirt megszárítjuk. Az impregnáló-oldathoz oldószerként mindenekelőtt viz és illékony szerves oldószerek, például kisszénatomszámu alkoholok elegyei jönnek tekintetbe. Az igy kapott tesztpapirok csikókra való felvágás után használhatók. Szükség esetén .azonban a papircsikok müanyagfóliák közé is foglalhatók /lásd az l,546,3o7 számú NSZK-beli szabadalmi leirást, vagy ilyen fóliákra felvihetők illetve felragaszthatók; előnyösen müanyagfólia és finomszemü háló közé foglaljuk a papírokat a 2,118,455 számú NSZK-beli szabadalmi leirás szerint. A következő példák a találmányt közelebbről ismertetik. 30 35 40 45 50 1. példa szűrőpapírt /Schleicher-Schüll 597 NT/ itatunk át a következő oldattal és 5o°C-on megszárítjuk: Glükóz-oxidáz Peroxidáz MES-puffer /pH 6, Tartrazin o-Toluidin Etanol Desztillált viz o; l,o M vizes oldat/ 222 mg 28 mg 5o ml 80 mg 42o mg 33 ml loo miig A tesztpapir 5o-looo mg$ glükózt tartalmazó vizeletekkel éles színátmenettel, világoszöld-kékesfekete szinnel reagál. 25o mg$ acetoaeetátot és körülbelül 2ooo mg$ -hidroxi-vajsavat is tartalmazó vizeletek gyakorlatilag azonos szinreakciót adnak. Akkor sem tapasztalunk változást, ha a tesztpapirokat 60 °C-on 15 napig vagy 4 hónapig 4o°C-on tárol- < juk. 2. példa Szürőpapirt /"hatman No.6/ a következő öszszetételü oldattal impregnálunk és 5o°C-on szántunk: Glükóz-oxidáz Peroxidáz MES-puffer /pH 5,8; l,o M vizes 222 mg 28 mg oldat/ 55 65 ml 80 mg 3oo mg 42o mg 3o ml, loo ml-ig Tartrazon Polivinil-pirrolidon o-Toluidin Etanol Desztillált viz ^„„ „.__.,. A tesztpapirok gyakorlatilag ugyanoíyan6 tulajdonságuak, mint az 1. példa szerint előállított papirok. -3. példa szűrőpapirt /Schleicher-Schüll 595/ a következő összetételű oldattal impregnálunk és Kn 5o u C-on szárítunk: DU Glükóz-oxidáz Peroxidáz MES-puffer /pH 6,2; l,o M vizes oldat/ Nátrium-lauroil-szarkozinát Naftolsárga S 65 o-Toluidin Etanol Desztillált viz 222 mg 28 mg 25 ml loo mg loo mg 42o mg 33 ml loo ml-ig 2
