170093. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás L-lizin előállítására
170093 10 A törzset a megadott összetételű táptalajon az első napon 7oo fordulat/perc keverési sebesség és 3 g Oo/líter/ÓTé. levegőztetési sebesség mellett tenyésztjük 28-3o C°-on. A második naptői kezdve az eljárás befejezéséig a tenyésztést looo fordulat/perc keverési sebesség és 4,8 g Op/liter/óra levegőztetés! sebesség mellett folytatjuk 33-35 C°-on. A fermentorba az eljárás egész ideje alatt 1 térfogatrész fermentációs táptalajra számitva percenként 1 térfogatrész levegőt vezetünk be. 86 óra múlva a folyékony kultúra 37 g/liter 1-lizint tartalmaz /L-lizin-monoklórhidrátban kifejezve/, ez a fermentációs táptalaj kezdeti szénhidr^ttartalmára számitva 31,2 #-nak felel meg. A folyékony kultúra egyéb aminosavakat nem tartalmaz. lo. példa Ii-lizin bioszintéziséhez homoszerin-, izoleucin- és valin-hiányos Micrococcus glutamicus T-3 törzset használunk. Az inokulumot az 1.példa szerinti módon tenyésztjük, majd 5 térfogat^ mennyiségben 75o ml térfogatú, terelőlemezzel ellátott és percenként 26o fordulatot végző rázóasztalra szerelt Erlenmeyer-lombikokba visszük át. A lombikok 25-25 ml alábbi összetételű, előzőleg sterilizált fermentációs táptalajt tartalmaznak: szacharóz loo g, ásványolaj eredetű szénhidrogéneken tenyésztett Candida tropicalis hidrolizátuma 10 15 20 132 ml /lo g,száraz kiindulási élesztőre számitva/, 3o g, 25 ammóniumszulfát kukoricaextraktum lo g, lecsapott kalciumkarbonát 2o g, csapviz 1 liter térfogatig, on a táptalaj pH-értéke 7,1-7,3. A Candida tropicalis hidrolizátumát az 1.példa szerinti módon állitottuk elő. A. táptalajt 4o percen át sterilizáltuk 12o-122 C° hőmérsékleten. Az L-lizint termelő törzset a megadott öszszetételü táptalajon 5 g O2/liter/óra levegőz- 35 tetési intenzitás mellett tenyésztjük 28-3o C°on. 86 óra múlva a folyékony kultúra 28 g/liter L-lizint tartalmaz /L-lizi-i-monoklórhidrátban kifejezve/, ez a fermentációs táptalaj kezdeti szénhidráttartalmára számitva 28 <-nak felel meg. Az L-lizin mellett a folyékony kultúra 40 l,o g alánint tartalmaz és nem tartalmaz valint és izoleucint. 11. példa L-iizin bioszir sintéziséhez homoszerin-, izoleucin- és valin-hiányos Micrococcus glutamicus T-3 törzset használunk. Az inokulumot az 1.példa szerinti módon tenyésztjük, majd 5 térfogat # mennyiségben 75o ml térfogatú Erlenmeyer-lombikokba visszük át amelyek 25-25 ml alábbi összetételű, előzőleg sterilizált fermentációs táptalajt tartalmaznak: répamelász 2oo Micrococcus glutamicus T-3 törzs biomasszájának hidrolizátuma g /melasz szénhidráttartalma 5o suly^/, 4oo ml /lo g.abszolút száraz biomasszára számitva/, 45 50 55 ammóniumklorid 25 g, lecsapott kalciumkarbonát 2o g, csapviz 1 liter térfogatig, a táptalaj pH-értéke 7,0-7,2. A törzs biomasszájának hidrolizátumát az alábbi módon állítjuk elő. A 2., 3. vagy lo. példa szerinti, L-lizin bioszintézisére irányuló eljárás befejezésekor kapott folyékony kultúrát centrifugáljuk /3ooo fordulat/perc, 3o perc/, az igy kapott biomaszsza loo g mennyiségét 3oo ml 8 n kén savban szuszpendáljuk. A hidrolízist 3 órán át végezzük autoklávban 129-131 C°-on. A hidrolizátumot ezután, szobahőmérsékletre hűtjük, és vizes báriumhidroxid-szuszpenzióval 7,o-7,2 pH-értékig semlegesítjük. A levált báriumszuífát csapadékot kiszűrjük, és a szürletet használjuk fel a fermentációs táptalaj alkotórészeként. A fermentációs táptalajt 4o percen át sterilizáljuk 120-122 Cö -on. Az L-lizint termelő törzset a megadott öszszetételü táptalajon 6 g Oj/liter/óra levegőztetési sebesség mellett 28-3o C°-on tenyésztjük rázóasztalon /26o fordulat/perc/. 86 óra múlva a folyékony kultúra 32 g/liter L-lizint tartalmaz /L-lizin-monoklórhidrátban kifejezve/, ez 34,2 ?í-nak felel meg a fermentációs táptalaj kezdeti szénhidráttartalmára vonatkoztatva. Szabadalmi igénypontok 1. Mikrobiológiai eljárás L-lizin előállítására homoszerint- vagy homoszerin-, izoleuoin- és valin-hiányos Micrococcus glutamicus vagy homoszerin-hiányos Brevibacterium sp. felhasználásával szénhidrátokat, mikróbás fehérjehidrolizátumot és nitrogénforrásként ammóniumsókat vagy karbamidot tartalmazó fermentációs táptalajon, 28-35 °C-on, levegőztetés és keverés mellett, a törzs biomasszájának a folyékony kultúrától való elválasztása és a célterméknek a kapott nativ oldatból való izolálása utján, azzal j e 1 lemé zve, hogy mikróbás fehérjehidrolizátumként ásványolaj eredetű szénhidrogéneken önmagában ismert módon tenyésztett Candida élesztő vagy a termelő törzs biomasszájának olyan hidrolizátumát alkalmazzuk, amelyet ásványi savval végzett kezelés, majd ezt követő semlegesítés vagy a Candida élesztő Asp. oryzae gombákból önmagában ismert módon elkülönített litikus enzimekkel végzett kezelése utján kapunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatositási mó3ja, azzal jellemezve, hogy a Candida élesztőt vagy a lizint termelő törzs biomasszáját 4-8 n ásványi savval kezeljük 3-lo ml sav/g kiindulási anyag mennyiségben 129-132 °C hőmérsékleten. 3. Az 1. vagy 2. igéiiyront szerinti eljárás fogaiiatositási módja, azzal jellemezve, hogy az ásványi sav semlegesítését ammóniával végezzük és az ekkor kapott amm'óniumsót használjuk fel a fermentációs táptalaj alkotórészeként. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatnsitási módja, azzal jellemezve, hogy a Candida élesztő litikus enzimekkel végzett kezelését 26 °C és 3o °C közötti hőmérsékleten végezzük 5)0 pH-értéken. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 770163, OTH, Budapest
