170025. lajstromszámú szabadalom • Eljárás higromycin B antibiotikum és egy új hidrolitikus hatású enzim, valamint ilyen enzimet tartalmazó enzimkészítmények előállítására

MAGTAB NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1973. XI. 23. (LE-728) Közzététel napja: 1976. X. 28. Megjelent: 1977. XI. 30. 170025 Nemzetközi osztályozás: C12D 13/10, 9/14 Feltalálók: Bashkovich Alexandr Pavlovich mérnök, Zimnukhova Evgenia Semenova mérnök, Prokopovich Agnessa Vladimirovna mérnök, Palatovskaya Olga ,Grigorievna mérnök, Pronina Maria Ivanovna mikrobiológus, Kulbakh Valter Osvaldovich mérnök, Rivkina-Pevtsova Khasya lonovna mérnök, Grinberg Grigory Efimovich orvos, Leningrád, Szovjetunió Tulajdonos: Leningradsky Nauchno-Issledovatelsky Institut Antibiotikov, Leningrád, Omutninsky Khimichesky Zavod, Omutninsk, Kirovskoi oblasti, Leningradskoe Proizvodstvenno-Khozyaistvennoe Obiedinenie Kozhevennykh Predpriyaty, Leningrád, Szovjetunió Eljárás Higromycin B antibiotikum és egy új hidrolitikus hatású enzim, valamint ilyen enzimet tartalmazó enzimkészítmények előállítására 1 A találmány tárgya eljárás az ismert Hygromycin B antibiotikum és egy új hidrolitikus hatású enzim, valamint ilyen enzimet tartalmazó enzimkészítmények előállítására. Ismeretesek olyan mikroorganizmustörzs-variánsok, például az Actinomyces hygroscopicus variánsai, amelyek röntgensugárzás hatására Higromycin B antibiotikumot termelnek [Antibiotika 15, 679]. Ezek a variánsok azonban nem termelnek proteolitikus hatású enzimeket. Az 2 239 650 számú NSZK-beli közzétételi iratból ismertek olyan Actinomyces hygroscopicus törzsek, amelyek proteolitikus hatású enzimeket termelnek. Az utóbb említett törzsek fermentálásánál azonban hátrányos, hogy a fermentációs hozamuk igen alacsonyak és ugyanakkor nem képződik az előnyösen felhasználható Higromycin B antibiotikum. Az említett NSZK-beli közzétételi iratban ismertetett eljárás továbbá anaerob, ellentétben a találmány szerinti aerob tenyésztési eljárással. 10 15 20 Az új, hidrolitikus hatású enzim semleges proteáz, molekulasúlya mintegy 37 000, izoelektromos pontja pH 8,8, hatását optimálisan 40 C° és 45 C° közötti hőmérsékleten fejti ki, vizes oldatban 25 pH 6,0 és 8,0 között stabil, míg vizes oldatban 50 C° hőmérsékletnél gyorsan inaktiválódik. Ezt a hidrolitikus hatású enzimet „hygrolytin"nek neveztük el, és a leírás során a továbbiakban így nevezzük. 30 A hygrolytin fehér, szagtalan por, amely vízben, nátrium-klorid izotóniás és hipertóniás oldatában, valamint novokain 0,25-2%-os oldatában könnyen oldódik, míg rövidszénláncú alkanolokban és acetonban nem oldódik. A hygrolytin ibolyántúli spektruma a fehérjék ibolyántúli spektrumához hasonló. A hygrolytin enzimaktivitását a kalciumionok stabilizálják. A magnéziumionok hasonló hatásúak, hatásúk azonban gyengébb. A kalciumionokat megkötő vagyületek, például az etiléndiamin-tetraecetsav a hygrolytin enzimaktivitását megszüntetik. A hygrolytin sót képez különböző, karboxilcsoportokat "hordó oldható vagy oldhatatlan polielektrolitokkal, továbbá szorbeálható számos polimeren vagy más, szorpcióra képes anyagon. A hygrolytin kémiai szerkezetét nem tudtuk megállapítani. A hygrolytin fajlagos kazeinolitikus aktivitása két-háromszorosa az ismert állati eredetű enzimek, így a tripszin és az a-chymotripszin aktivitásának. A hygrolytin természetes fehérjéket, így például elasztint, kollagént, zselatint, fibrint, albumint vagy hemoglobint hidrolizálni képes, továbbá trombolízisre (trombusok feloldására) és a trombusképződés megelőzésére is képes. További hatása a tejalvadás gátlása. A hygrolytin különböző felhasználási területeken alkalmazható, ahol fehérjeszubsztrátok hidrolízise a cél. így felhasználható többek között a mezőgaz-170025