169999. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 7-amino-3-dezacetoxi-cefalosporánsav új acilszármazékainak előállítására

15 169999 16 4. példa Az alábbi komponensekből fermentációs közeget készítünk: Kykuto porított bouillon Élesztő extrakt 2súly% 0,3 súly% 500 ml-es Sakaguchi-üvegekben 100 ml fermentációs közeget (pH 7,0) szokásos módon sterilezünk, majd kacsnyi 2 napos ferde Pseudomonas fragi FERM-P 2703 tenyészettel inokuláljuk. A mikroorganizmust 30 C°-on 40 órán át rázatógépen növekedni hagyjuk, majd a sejteket centrifugálással elválasztjuk, 30 ml 0,05 mólos foszfát-puff err el (pH 5,6) mossuk és 0,2 mólos foszfát-pufferben (pH 5,6) szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz (3 ml) 3 ml 0,2 mólos foszfát-puff er oldatot (pH 5,6) adunk, mely 2% 3-mezilaminofenil-D-glicint és 0,4% 7-amino-3-metil-3-cefém-4-karbonsavat tartalmaz. Az elegyet rázatógépen 2 órán át inkubáljuk. A reakcióelegyben a 7-(3-mezilaminofenil-D-glicilamino)-3-metil-3-cefém-4-karbonsav termelést vékonyrétegkromatográfiás úton a 2. példa szerinti módszerrel mutatjuk ki. (RF közel 0,6). A 7-(3-mezilaminofenil-D-glicÜamino)-3-metil-3-cefém-4-karbonsav képződését a reakcióelegyben Bacillus subtilis PCI 219 felhasználásával bio-kísérlettel határozzuk meg. Kitermelés: 20 Mg/ml. 5. példa Az alábbi komponensekből fermentációs közeget készítünk: Kyokuto porított bouillon Élesztő extrakt 2súly% 0,3 suly% 500 ml-es Sakaguchi-üvegekben 100 ml fermentációs közeget (pH 7,0) szokásos módon sterilezünk, majd kacsnyi 2 napos ferde Pseudomonas fragi FERM-P 2703 vagy Pseudomonas melophthora FERM-P 2705 tenyészettel inokuláljuk. A mikroorganizmusokat 30 C°on 40 órán keresztül rázatógépen növekedni hagyjuk, majd a sejteket centrifugálással eltávolítjuk. 3 ml felül elhelyezkedő folyadékhoz 3 ml 0,2 mólos foszfát-puffert adunk (pH 5,6) mely 2% 3-mezilaminofenil-D-glicin-metil-10 15 észtert és 0,4% 7-amino-3-metil-3-cefém-4-karbonsavat tartalmaz. Az elegyet rázatógépen 37 C°-on 2 órán át inkubáljuk. A reakcióelegyben a 7-(3-mezilaminofenil-D-glicilamino)-3-metil-3-cefém-4-karbonsav termelést a 2. példában megadott módon vékonyrétegkromatográfiás úton mutatjuk ki, RF

közel 0,6. A reakcióelegyben képződő 7-(3-mezila mi n o f e n il-D-glicilamino)-3-met il-3-cefém-4-karbonsav mennyiségét Bacillus subtilis PCI 219 felhasználásával bio-kísérlettel határozzuk meg. Az eredményeket az alábbi táblázatban ismertetjük: 25 35 40 Mikroorganizmus 7-(3-mezilaminofenil-D-glicilamino)-3-- met il-3-cef ém-4--karbonsav hozama (Mg/ml) Pseudomonas fragi 20 FERM-P 2703 Pseudomonas melophthora FERM-P 2705 30 30 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás (I) általános képletű 7-(3-alkilszulfonamidofenil-D-glicilamino)-3-metil-3-cefém-4-karbon-30 savak előállítására (ahol R jelentése 1—4 szénatomos alkil-csoport) azzal jellemezve, hogy a (II) képletű 7-amino-3-metil-3-cefém-4-karbonsavat vagy sóját egy (III) általános képletű 3-alkilszulfonamidofenil-glicinnel (ahol R jelentése a fent megadott), sójával vagy 1—4 széntatomos alkilészterével reagáltatunk Pseudomonas fragi FERM-P 2703, Pseudomonas maltophila FERM-P 2704, Pseudomonas melophthora FERM-P 2705, Xanthomonas citri IFO 3835 vagy Acetobacter acetosus IFO 3129 mikroorganizmus fermentleve vagy abból nyert anyag jelenlétében. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy fermentléből nyert 45 anyagként szűrletet vagy felül elhelyezkedő folyadékot alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy fermentléből nyert anyagként sejtszuszpenziót alkalmazunk. 2 lap rajz A kiadásért felel:'a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 774220 - Zrínyi Nyomda