169981. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hordozóhoz kötött enzimek és/vagy biológiailag aktív anyagok előállítására

10. példa Mindenben a 4. példa szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy 1 g glükozamint kötünk meg. A kopolimer-glükozamin komplex súlya: 1600 mg 11. példa Mindenben a 4. példa szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy 1 g piridoxamindihidrokloridot kötünk meg. A kopolimer-piridoxamindihidroklorid komplex súlya: 1724 mg 12. példa Mindenben a 4. példa szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy 1 g. p-aminofenilmercuriacetátot kötünk meg. A kopolimer-p-aminofenilmercuriacetát komplex súlya: 2021 mg A példák kivitelezése folyamán alkalmazott munka és mérési módszerek: Kopolimer készítés: A megfelelő arányú monomer keveréket 3,5 súlyrész toluolban 3 órán át 80 C hőmérsékleten keverés közben reagáltatjuk, majd az elegyet további 3 órán át ezen a hőmérsékleten tartjuk. A képződött kopolimert a reakcióelegyből kiszűrjük, HOC -on 20 órán át szárítjuk, majd porítjuk és megfelelő méretű szitán át szitálva' a kívánt szemcseméretű termékké alakíthatjuk. Megkötés: 20 ml 0,1 M 7,5 pH értékű foszfát pufferben 1 g enzimet +4 C -on hűtés közben oldunk, majd az oldatba a kopolimert bekeverve a pH-értéket 0,3 M ammóniumhidroxid oldattal 7,5 értéken tartjuk. A teljes kötés ideje kb. 6 óra, mely idő alatt 14 ml 0,3 M ammóniumhidroxid-oldat fogy. A duzzadt gyantát, melyen az enzim megkötődött (rugalmas gél) kiszűrjük, 20 ml 0,1 M 7,5 pH értékű foszfát -pufferrel, majd 2 x 20 ml 1,0 M nátriumklorid oldattal és végül 2 x 20 ml desztillált vízzel mossuk. A mosófolyadékokat térfogatra és aktivitásra mérjük. 169981 Aktivitás mérése: A tripszin aktivitás mérése eszteráz aktivitá mérésen alapul, pH-stat módszerrel (a lúgfogyasztá 5 mértéke 7,8 pH érték mellett) benzoil-1-arginin-etil észter szubsztráttal. A penicillinaciláz mérés G-penicillin szubsztrátta történik. 10 Enzim aktivitási egységek: Tripszin: 1 E = ljurnól szubsztrátbontás 26 C -on pH 7,8 értéknél 1 perc alatt. Penicillinaciláz: lE = ;umól szubsztrátbontá 37 C -on, pH 7,5 értéknél 1 perc alatt. 15 20 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás kopolimer hordozóhoz kötött enzimei és/vagy biológiailag aktív anyagok előállítására azzal jellemezve, hogy szilárd hordozóként olyai térhálós kopolimer szerkezetet alakítunk ki, mely ben maleinsavanhidridet és/vagy itakonsavanhidride 25 alkalmazunk 8-51%-nyi mennyiségben és hidrofób monomerként sztirolt, vagy orto-metil-sztirolt és divinilbenzolt alkalmazunk 31-75%-nyi, hidrofil monomerként pedig metakrilsavat 13-32%-nyi mennyiségben, a monomereket ismert módon poli-30 merizáljuk, majd az így kialakított kopolimer hordozón vizes közegben +4 C hőmérsékleten, 6-18 óra alatt, pH 5-9 értékek között az enzimet és/vagy a kis molekulasúlyú primer aminocsoportokát tartalmazó biológiailag aktív anyagokat kova^ 35 lensen megkötjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítás: módja, azzal jellemezve, hogy a hordozó kompo nenseként 30,7-35,8% maleinsavanhidridet és/vagy itakonsavanhidridet alkalmazunk. 40 3. Az 1-2. igénypontok szerinti eljárás fogana tösítási módja, azzal jellemezve, hogy hidrofób monomerként 49-55% sztirolt és/vagy orto-metil -sztirolt és divinilbenzolt alkalmazunk. 4. Az 1-3. igénypontok szerinti eljárás foga 45 natosítási módja, azzal jellemezve, hogy hidroff monomerként 13—15% metakrilsavat alkalmazunk 5. Az 1—4. igénypontok szerinti eljárás fogana tösítási módja, azzal jellemezve, hogy biológiailag aktív kis molekulasúlyú primer aminként L-argi 50 nint, L-lysint, glükozamint, piridoxamin-dihidroklo ridot, vagy p-aminofenil-merkuriacetátot alkalma zunk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 4 774219 - Zrínyi Nyomda