169870. lajstromszámú szabadalom • Eljárás véralvadást gátló oligopeptid-származékok előállítására
15 Az egyesített vizes oldatokat pH 2-re savanyítjuk 1 n kénsavval és a kivált olajat kivonjuk etil-acetáttal. Az etil-acetátos oldatot nátrium-szulfáton szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 100 ml éterben oldjuk és 10 ml diciklohexilamint adunk hozzá. A kivált kristályokat szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 20,3 g (75%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 120—122 C°. 2. lépés: benziloxikarbonil-D-allo-izoleucil-L-prolil-NG -benziloxikarbonil-L-arginin-laktám 5,43 g (10 mmól) benziloxikarbonil-D-allo-izoleucil-L-prolil-diciklohexilammónium sót 40 ml 0,5 n kénsavban és 50 ml etilacetátban oldunk. A vizes fázist etil-acetáttal mossuk, majd az egyesített etil-acetátos oldatokat vízzel mossuk, mátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot feloldjuk 10 ml metilén-kloridban és —15 C°-on hozzáadunk 1,11 ml (10 mmól) N-metil-morfolint és 1,32 ml (10 mmól) klórszénsav-izobutilésztert. 5 perc keverés után a reakcióelegyhez adunk — 15 Cc -on 4 g (12 mmól) N G -benziloxikarbonil-L-arginin-laktám-hidrokloridot (9. példa, 2. lépés) és 1,68 ml (12 mmól) trietilamint 15 ml dimetilformamidban. Három óra után a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot benzolban oldjuk és vízzel, 1 n nátrium-hidroxiddal, vízzel, majd szárítjuk és bepároljuk. A maradékot diizopropiléterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. 4,2 g (66%) cím szerinti terméket kapunk. R| 0,60—0,65. 3. lépés: benziloxikarbonil-D-allo-izoleucil-L-prolil-NG -benziloxikarbonil-L-argininaldehid 3,8 g (6 mmól) benziloxikarbonil-D-allo-izoleucil-L-prolil-NG -benziloxikarbonil-L-arginin-laktámot feloldunk 20 ml tetrahidrofuránban és hozzáadunk 11,2 ml 0,4 mólos tetrahidrofurános lítium-alumínium-hidrid oldatot. 5 perc keverés után a reakcióelegyet pH 3-ra savanyítjuk 1 n sósavval, majd az oldatból kb. 20 ml tetrahidrofuránt ledesztillálunk vákuumban. A maradékot 30 ml vízzel hígítjuk és 10 ml éterrel mossuk. A vizes fázist etil-acetáttal kivonatoljuk, az etil-acetátos oldatot 15%-os vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éter-petroléter elegyével eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. 2,5 g (68%) cím szerinti terméket kapunk. Rj 0,42— 0,52. 4. lépés: benzoil-D-allo-izoleucil-L-prolil-L-argininaldehid-p-toluolszulfonát 2,5 g (4 mmól) benziloxikarbonil-D-allo-izoleucil-L-prolil-NG -benziloxikarbonil-L-argininaldehidet 30 ml metanolban feloldunk, hozzáadunk 1,6 ml (8 mmól) diciklohexilamint és 0,25 g csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén (a szabad tripeptid-aldehid R| értéke 0,25—0,35) a katalizátort kiszűrjük és az oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékot feloldjuk 40 ml vízben és mossuk 10 ml metilén-kloriddal. A vizes fázist 1 n kénsavval pH 3-ra savanyítjuk, majd 1 n nátrium-hidroxiddal pH 8-ra lúgosítjuk és újból kimossuk 2 X 10 ml metilén-kloriddal. Ezt követően a vizes oldathoz 5 ml 1 n nátrium-hidroxidot és 0,58 ml (5 mmól) benzoil-kloridot adunk, majd 0—5 169870 16 C°-on keverjük. A reakció végén az elegyet pH 6-ra savanyítjuk 1 n kénsavval, majd éteres mosás után vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 20 ml metanol és 20 ml kloroform elegyével eldörzsöljük, szűrjük és á 5 szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot feloldjuk kb. 10 ml vízben és acetát-ciklusú AG 1—X2 ioncserélő gyanta (Bio-Rad, Richmond, Calif. USA) segítségével ecetsavas sóvá alakítjuk. A benzoil-D-allo-izoleucil-L-prolil-L-argininaldehid-acetátot tartalmazó vizes 10 oldatot vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot feloldjuk 10 ml etanolban, hozzáadunk 0,9 g vízmentes p-toluolszulfonsavat, majd az oldatot éterrel hígítjuk. A kivált csapadékot szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 1,6 g (60%) cím szerinti terméket kapunk. Rf 0,35— 15 0,45. 12. példa 20 Acetil-D-fenilalanil-L-prolil-L-argininaldehid-acetát előállítása 0,52 g (1 mmól) D-fenilalanil-L-prolil-L-argininaldehidet feloldunk 1,1 ml 1 mólos ecetsavas ecetsavanhid-25 rid-oldatban és szobahőmérsékleten állni hagyjuk 2 órán át. Az oldatot vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk, majd feloldjuk 10 ml n-butanolban és mossuk 15%-os vizes konyhasó-oldattal. A butanolos oldatot bepároljuk, 30 éterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. 0,35 (70%) cím szerinti terméket kapunk. Rf 0,5—0,6. 35 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az I. általános képletű — ahol Y jelentése formil- vagy hidroxi-metil-csoport, X jelentése hidrogénatom, rövid szénláncú alkanoil-, 40 fenil-(rövid szénláncú)-alkanoil-, egy gyűrűt tartalmazó aroil- vagy rövid szénláncú alkoxi-karbonil-csoport, A jelentése glicin-csoport, vagy oldalláncában rövid szénláncú alkil-csoportot tartalmazó alfa-aminosav-45 -csoport, mely kívánt esetben rövid szénláncú alkil-merkapto-csoportot tartalmaz, vagy fenil-(rövid szénláncú)-alkil-alfa-aminosav-csoport, melyek L-vagy D-konfigurációjúak lehetnek, B jelentése L-prolin- vagy L-valin-csoport — 50 oligopeptidek és azok savaddíciós sói előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely Nw-védett L-arginin-laktámot a peptidkémiában ismert módon a) amino-terminálison lehasítható védőcsoporttal védett dipeptiddel kondenzáljuk, majd az így kapott vé-55 dett oligopeptid-laktámot védett oligopeptid-aldehiddé redukáljuk, a védőcsoportokat eltávolítjuk, kívánt esetben az oligopeptid-aldehidet oligopeptid-alkohollá redukáljuk, majd kívánt esetben a kapott oligopeptid-származékot acilezzük és/vagy savaddíciós sóvá alakítjuk, 60 vagy b) amino-terminálison lehasítható védőcsoporttal védett rendre következő aminosavakkal kondenzáljuk, majd az így kapott védett oligopeptid-laktámot védett oligopeptid-aldehiddé redukáljuk, a védőcsoportokat el-65 távolítjuk, kívánt esetben az oligopeptid-aldehidet oligo-
