169831. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 6-amino-penicillánsav előállítására benzil-penicillinből vagy fenoxi-metil penicillinből vízben oldhatatlan enzim komplexxel

13 169831 14 mintát veszünk, és a mintákat vizuálisan megvizsgáljuk mechanikai szempontból. A XAD—7 típusú gyanta gyöngyein lényegesen nagyobb töredezést lehet megfigyelni, mint az IRC—50 gyanta gyöngyein. Az utóbbi gyanta mintája 64 óra múltán hasonlított az előbbi gyanta 8 óra kezelés után vett mintájához. Ezek az eredmények világosan bizonyítják az IRC—50 típusú gyanta nagyobb mechanikai szilárdságát. 21. példa 235 g 39,4 jj.M/perc/g aktivitású, Amberlite IRC—50 gyanta alapú enzim komplexet (előállítása az 1. példában) tíz egymást követő kísérletben benzilpenicillin G káliumsójának hasításához használunk. A penicillin 6,25%-os oldatával végezzük a kísérleteket. A benzilpenicillin G káliumsó 1 liter térfogatú oldatában két és fél órán át, 37 °C-on és 7,8 pH-n végezzük a hasítást. Az Amberlite IRC—50 gyantát kiszűrjük és desztillált vízzel mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot forgó vákuumbepárló készülékkel betöményítjük, a betöményített oldatot azonos térfogatú metil-izobutil-ketonnal keverjük össze, 4—10 °C-ra hűtjük le és megsavanyítjuk. A kivált 6-aminopenicillánsavat kevés desztillált vízzel mossuk, acetonnal átöblítjük és megszárítjuk. A 6-aminopenicillánsav átlagos hozama a tíz kísérletben 91,3%. 22. példa Aciláz enzim adszorpciója uretánnal bevont polietilénre Kis sűrűségű, 400 [j.m-nél kisebb szemcsenagyságú polietilént uretánpolimerrel (forgalomba hozza: Urithane 641W, Cray Valley Products Limited) vonunk be, és tíz napig szárítjuk. Az anyagot ezután 1 órán át mossuk 20%-os vizes acetonnal, azután desztillált vízzel bőségesen átöblítjük, majd 5 g-os részleteire enzimet adszorbeáltatunk 5 órán át 4,8—9,0 pH tartományban. (125 ml, 54,0 [jiM/perc/ml, 3,80 [xM/perc/mg protein). Az uretánnal borított szemcséket kiszűrjük, 75 ml 3,3%-os glutáraldehiddel kezeljük 3 órán át, azután 7,8 pH-n kiegyenlítjük az 1. példában leírt módon. Annak ellenére, hogy az uretánnal borított szemcsék átlagos mérete kisebb, mint az IRC—50 gyanta szemcséi, a kapott specifikus aktivitás 2—3-szor kisebb, mint az IRC—50 gyanta felhasználásával készített enzim komplex aktivitása. pH nedves súlyra számított aktivitás [xM/perc/g 4,8 11,3 5,2 14,0 5,6 16,4 6,0 13,2 6,4 13,6 7,0 12,3 7,5 7,8 8,0 10,0 8,5 9,0 90 12,2 23. példa Aciláz enzim adszorpciója nylonra pH nedves súlyra számított aktivitás [j. M/perc/g 4,8 41,7 5,2 36,1 5,6 26,9 6,0 22,2 6,4 15,7 7,0 17,6 7,5 17,6 8,0 21,3 8,5 15,7 9,0 9,3 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás 6-amino-penicillánsav előállítására, amelynek során a benzilpenicillint vagy a fenoximetilpenicillint vagy azok egy sóját vizes oldatban 6,0—9,0 pH-n egy vízben oldhatatlan enzim komplexszel kezeljük, mely enzim komplex egy vízben oldhatatlan polimer hordozóra adszorbeált és térhálósítószerrel, nevezetesen glutáraldehiddel, glioxállal vagy formaldehiddel a hordozóra kapcsolt penicillin-aciláz, azzal jellemezve, hogy polimer hordozóként metakrilsav valamely vízben oldhatatlan polimerjét vagy kopolimerjét használjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy benzilpenicillin beosztása esetén 1,5—30 mikromól 6-amino-penicillánsav/perc/mg protein tisztaságú penicillin-aciláz enzimet tartalmazó enzim komplexet használunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy makroporózus hordozót tartalmazó enzim komplexet használunk. 4. Az 1., 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás foganac t i 1 10 r t V i 15 i í t s í 20 2 i ( 1 1 25 s 30 35 40 45 50 55 60 65 5 Orgolacq (porított nylonhab 30 p átmérőjű szemcsékben, gyártja az Ato Chimie Ltd., Nagybritannia) polimert 1 órán át mosunk 65%-os hangyasavval, azután desztillált vízzel bőségesen átöblítjük 10 g-os részleteire enzimet (100 ml.) 50,9 [xM/perc/ml, 4,7jj.M/perc/ 10 mg protein) adszorbeáltatunk 16 órán át 4,8 és 9,0 közötti pH-n. A porított nylont kiszűrjük és 100 ml 3,3%-os glutáraldehiddel kezeljük 3 órán át, azután elkülönítjük és mossuk az 1. példa szerinti módon. A legnagyobb aktivitás, melyet 4,8 pH-nál kapunk, 41,7 JJLM/ 15 perc/g nedves súly, ami hasonló a jellegzetes IRC—50 gyanta alapú enzim komplex aktivitásához. Ha azonban figyelembe vesszük a nylon és az IRC—50 gyanta szemcseméretének különbségét, akkor az IRC—50 gyanta alapú enzim komplex sokkal előnyösebbnek bi-20 zonyul. így az IRP—64 jelű készítmény (gyógyszerészeti minőségű IRC—50 gyanta, melynek szemcsenagysága 0,037—0,149 mm) összekapcsolható az acilázzal, amikoris 478 [i.M/perc/kg nedves súly specifikus aktivitású készítményt kapunk, melynek aktivitása több, mint 11-25 szer nagyobb a nylon alapú készítmény aktivitásánál. 7