169827. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-amino-cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására
169827 7 8 etilamint, az anilint, piridint és piperidint említjük meg. A bázis fogyásából a reakciósebességre és a reakció befejezésének időpontjára következtethetünk. A reakciósebesség főleg a rendelkezésre álló, hordozóhoz kötött penicillin-aciláz és a (II) általános képletű vegyület között fennálló mennyiségű aránytól, valamint az alkalmazott penicillin-aciláz-gyanta fajlagos aktivitásától függ. A hordozóhoz kapcsolt penicillin-aciláz fajlagos aktivitását az 1 g nedves állapotú termékre vonatkoztatott egységekben adjuk meg. 1 egység az a penicillin-aciláz-aktivitás, amely 37 °C-on 7,8 pH érték mellett 1 perc alatt 1 mikromól 6-(<x-fenil-acetamido)-2,2-dimetil-penám-3-karbonsavat 6-amino-2,2-dimetil-penám-3-karbonsavvá és fenilecetsavvá hidrolizál. 1 kg 7-fenilacetamido-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav 2 óra alatt végbemenő bontásához körülbelül 70 000 egység penicillin-aciláz kell, ami mintegy 1 kg nedves enzimgyantának felel meg. 6%-os koncentráció esetén a reakcióelegy térfogata 16,6 liter. Hosszabb bontási idő esetében megfelelően kevesebb penicillin-aciláz szükséges. A reakció befejeztével a hordozóhoz kötött penicillinacilázt szűréssel vagy centrifugálással elválasztjuk, utána rögtön friss szubsztrátum bontására felhasználhatjuk. A kapott (I) általános képletű vegyületet önmagában ismert módon különítjük el a tiszta oldatból; szokásos eljárások például a szerves savakkal, így ecetsavval, vagy a szervetlen savakkal, például só-, kén- és foszforsavval történő kicsapás az izoelektromos ponton, vagy a kromatográfia. A kicsapott, illetve kromatográfiai úton kapott terméket a lehasított csoport teljes eltávolítása céljából alkalmas oldószerrel, így például butilacetáttal vagy acetonnal mossuk, majd vákuumban szárítjuk. A szárított termék a tiszta (I) általános képletű vegyület. A találmány szerinti eljárásban előállítható (I) általános képletű vegyületek önmagában ismert módon, például a 7-aminocsoport acilezésével értékes, mikrobaellenes hatóanyagokká alakíthatók (lásd: Flynn B. E. H.: Cephalosporins and Penicillins, Chemistry and Biology, Academic Press, New York, (1972)]. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákkal közelebbről megvilágítjuk. 1. példa (II) általános képletű vegyületek bontása 2 m mól (II) általános képletű vegyületet adott esetben nátriumhidroxid-oldat adagolása mellett 20 ml vízben oldunk. Az oldatot termosztátban 37 °C-on keverjük, majd mintegy 5 g, az AJ példa szerint előállított nedves enzimgyantát adunk hozzá. Reakció alatt a pH-t pH-sztát segítségével n/10 nátriumhidroxid-pldattal állandóan 7,5 értéken tartjuk. Amikor a fenti pH érték fenntartására további lúgadagolás már nem szükséges, a reakció befejeződött. A hordozóhoz kötött penicillin-acilázt üvegszűrőn leszűrjük és vízzel kimossuk. A mosóvízzel egyesített szűrletet 30 °C-on vákuumban 5 ml térfogatra betöményítjük. A tömény oldathoz 5 ml butilacetátot adunk, és a pH értéket 5 n sósavval az izoelektromos pontra (pH = 3,7) beállítva a 7-amino-cef-3-em-4-karbonsav-származékot kicsapjuk. A csapadékos oldatot 2—3 órán át hűtőszekrényben állni hagyjuk, majd szűrjük. A kristályos terméket 10 ml vízzel, majd 10 ml acetonnal mossuk és vákuumban szárítjuk. A kapott termék egy mintájából p-dimetil-aminobenzaldehiddal a 7-aminocsoportot lehasítjuk és fotometriás módszerrel meghatározzuk (módosított Svotek félé eljárás; lásd: 116 959 sz. cseh szabadalmi leírás (1965)]; így megvizsgálhatjuk, hány százalék (I) általános képletű vegyületet tartalmaz a termék. A 415 nm hullámhossznál mérhető extinkciót 7--amino-3-acetoxi-cef-3-em-4-karbonsav és a 7-amino-3--metil-cef-3-em-4-karbonsav etalon-görbéivel összehasonlítottuk. Emellett a termékek azonosságát infravörös és 1 H-magrezonanciás színkép, valamint butanol-jegecet-víz 12:3:5 arányú elegyével végzett papírkromatográfiával vizsgáltuk. 1. aj példa Kiindulási anyag: 908 mg 7-[(2-tienil)-acetamidol-3--acetoximetil-cef-3-em-4-karbonsav-nátrium]. Reakcióidő: 42 perc. Végtermék: 7-amino-3-acetoximetil-cef-3-em-4-karbonsav. Hozam: 520 mg (az elméleti hozam 98%-a). Tisztaság: 98%. Rf : 0,27 (0,10 R f -értékű 7-amino-3-metil-cef-3-em-4--karbonsav nincs). A reakciót a B) reakcióvázlat szemlélteti. 1. b) példa (C) reakcióvázlat) Kiindulási anyag: 866 mg 7-[(2-tienil)-acetamido]-3--piridmiummetil-cef-3-em-4-karboxilát. Végtermék: 7-amino-3-piridiniummetil-cef-3-em-4-karboxilát. Reakcióidő: 35 perc. Rf : 0,05. A molekulában levő piridingyűrű miatt a termék izoelektromos ponton való kicsapással nem különíthető el. A reakció teljességét, valamint a termék azonosságát papírkromatográfiai módszerrel vizsgáltuk. 1. c) példa (DJ reakció vázlat) Kiindulási anyag: 687 mg 7-fenilacetamido-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav. Reakcióidő: 27 perc. Végtermék: 7-amino-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav. Hozam: 350 mg (84%); tisztaság: 99%. Olvadáspont: 238—240 °C (bomlás közben). 1. d) példa (EJ reakció vázlat) Kiindulási anyag: 696 mg 7-fenoxiacetamido-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav. Végtermék: 7-amino-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav. Hozam: 350mg (82%); tisztaság: 96%. Olvadáspont: 238—240 °C (bomlás közben). 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
