169794. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikrobiális lipáz előállítására

5 169794 6 sorban az a jellemző tulajdonsága különbözteti meg az egyéb ismert lipázoktól, hogy epe jelenlétében számottevően megnövelt enzim-aktivitást mutat. így például legalább 150%-kal megnövekszik eredeti aktivitása 1: 200 hígítása kutya-epe hozzáadása esetén; ezt a hatást 37 °C hőmérsékleten, 0,1 mólos foszfát-pufferoldatban, 7,0 pH-értéken mértük gyógyszerkönyvi minőségi olívaolajjal, mint szubsztrátummal szemben, 50 perces enzim-reakció után. Ezt a tulajdonságát számszerűen is alátámasztja a következő összehasonlító vizsgálat: Összekeverünk 1 térfogatrész gyógyszerkönyvi minőségű olívaolajat, 3 térfogatrész vízzel hígított kutyaepét, 4 térfogatrész 0,1 mólos foszfát-puffért és 1 térfogatrész IE lipázt, majd az elegyet 37 °C-on, 50 percig keverjük. Az olívaolajból ily módon előállított zsírsavat 0,05 normál nátriumhidroxid-oldattal titráljuk. A lipáz relatív aktivitását (%) a zsírsav mennyiségéből úgy számítjuk ki, hogy a zsírsav eredeti, kutya-epe hozzáadása nélküli aktivitását 100-nak vesszük. A Phycomyces, Candida, Rhizopus és Aspergillus mikroorganizmus fajokkal előállított lipázokat vizsgálva a 13. ábrával szemléltetett eredményeket kapjuk. A találmány szerinti eljárással előállított lipáz például emésztést elősegítő gyógyszerkészítményekben alkalmazható, ember- és állatgyógyászati célokra. Az ilyen gyógyszerkészítmények például diszpepszia, funkcionális diszpepszia, akut posztoperatív diszpepszia és krónikus pankreatitisz gyógykezelésére alkalmasak. A találmány szerint előállítható gyógyszerkészítmények az új típusú lipáz kisebb vagy nagyobb mennyiségét egyéb hatóanyag nélkül, vagy más emésztést elősegítő szerekkel kombinálva tartalmazhatják. Az ilyen emésztést elősegítő gyógyszereket a szokásos és a szakmában jól ismert módon, a jelenleg ismert típusú lipáz enzimkészítményekhez hasonlóan alkalmazhatjuk gyógyászati célokra. A lipáz szokásos napi adagja 20 E és 6000 E között lehet felnőtt személyek gyógykezelése esetén. A találmány szerinti eljárással előállítható új típusú lipáz enzimet tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítási módját illetőleg összetételét közelebbről az alábbi példák szemléltetik: 1. Tabletták előállítása Lipáz 30 mg (1650 E) kukoricakeményítő 20 mg tejcukor 42,5 mg hidroxipropil-cellulóz 2 mg kalcium-karboximetil-cellulóz 5 mg magnézium-sztearát 0,5 mg hidroxipropil-metil-cellulóz-ftalát 10 mg 110,0 mg A tablettákat a gyógyszer-technológiában szokásos módon készítjük el. A tablettánként a fenti anyagmenynyiségeket tartalmazó készítmény adagja felnőtt emberek gyógykezelése esetén célszerűen napi 3 tabletta, vagyis 1 tabletta minderi étkezés után. 2. Tabletták előállítása Lipáz poralakú marhaepe 5 kukoricakeményítő tejcukor hidroxipropil-cellulóz kalcium-karboximetil-cellulóz magnézium-sztearát 10 hidroxipropil-metil-cellulóz-ftalát 20 mg (1100 E) 10 mg 20 mg 42,5 mg 2 mg 5 mg 0,5 mg 10 mg 110,0 mg A tablettákat a gyógyszer-technológiában szokásos 15 módon készítjük el. A tablettánként a fenti anyagmennyiségeket tartalmazó készítmény napi adagja felnőtt emberek gyógykezelése esetén célszerűen napi 3 tabletta, vagyis 1 tabletta minden étkezés után. 20 3. Szemcsézett készítmény Lipáz 2 mg (110 E) mikrobiális savas proteáz 25 mg mikrobiális amiláz 35 mg 25 mikrobiális celluláz 20 mg Pankreatin 75 mg tejcukor 143 mg mikrokristályos cellulóz 50 mg hidroxipropil-cellulóz 20 mg 30 hidroxipropil-metil-cellulóz-ftalát 30 mg 400 mg A szokásos módon szemcsésített készítmény szokásos 35 napi adagja felnőtt emberek gyógykezelése esetén 1200 mg vagyis 400 mg minden étkezés után. 4. Kapszulázott készítmény előállítása Az előzőkben ismertetett szemcsés készítménynek 400 mg mennyiségét egy kapszulába töltjük. Az ilyen 40 kapszulázott készítmény szokásos napi adagja felnőtt emberek gyógykezelése esetén 3 kapszula, vagyis 1—1 kapszula minden étkezés után. A találmány szerinti eljárással előállított lipáz alkalmas zsíros tejipari vagy hasonló készítmények, például 45 margarin ízének javítására is, amint ezt az alábbi példa szemlélteti: Margarin ízének javítása. 1 kg friss tejszínhez (zsírtartalom: 36%) 7,2 g lipázt (a találmány szerint előállított új típusú lipázt, 50 E/mg) 50 és 40 g nátrium-kloridot adunk. Ezt az elegyet alaposan összekeverjük, majd 38—43 °C hőmérsékleten állni hagyjuk. Amikor az elegyben a savtartalom eléri az 1% tejsavnak megfelelő szintet, akkor az elegyet 70 °C-ra melegítjük és 10 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk, 55 majd 4—5 °C hőmérsékleten tároljuk. Az így elkészített lipáztartalmú tejszín-készítményből 50—70 kg mennyiséget keverünk be 1000 kg szokásos módon elkészített margarinba. A találmány szerinti eljárás további részleteit az 60 alábbi részletes kiviteli példa szemlélteti; e példában a „részek" súlyrészeket jelentenek, amennyiben más megadva nincs. A súlyrészek és térfogatrészek közötti viszony a g és ml közötti viszonynak felel meg. Az alábbiakban megadott lipáz-titereket a következő 65 módszerrel határoztuk meg. 3