169437. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szedatív hatású peptidek előállítására
13 Rf Bu : Py : Ac : víz rendszerben : 1/4 :1] = 0,17, szilíciumdioxidon. 169437 14 [4:3/4: 4. példa A-Glu-His-D-Phe-OH-acetát (ahol A jelentésé H-Val, H-Ala, H-0-Ala vagy Dam) és H-Met-Gln-His-D-Phe-OH-acetát a) Boc-Ala-Glu(OtBu)-His-D-Phe-OtBu 1,05 (2 mmól) Boc-Ala-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 -ból kiindulva az 1. a) példa szerinti módon eljárva azidot állítunk elő. Az azidot 0,44 g H-D-Phe-OtBu-hez adjuk, majd a pH-t trietilaminnal 6,9-re állítjuk be. A reakcióelegyet 70 órán át keverjük, majd az 1. a) példa szerinti módon feldolgozzuk. Kitermelés: 0,93 g. Rf Bu : Py : Ac : víz rendszerben [4 : 3/4 -U/4: 1] = 0,90, szilíciumdioxidon. b) A megfelelő hidrazinból kiindulva állítjuk elő az alábbi vegyületeket: Boc-Val-Glu(OtBu)-His-D-Phe-OtBu, Boc-j3-Ala-Glu(OtBu)-ffis-D-Phe-OtBu, Dam-Glu(OtBu)-His-D-Phe-OtBu, Boc-Met-Gln-His-D-Phe-Otbu. c) A védőcsoportok eltávolítása Az 1. b) példa szerinti módon eljárva távolítjuk el a védőcsoportokat az a) és b) lépésekben kapott tetrapeptid analógokból, így az alábbi peptid-acetátokat kapjuk: 10 15 20 oldatához adjuk, majd a reakcióelegy pH-ját trietilaminnal 7,0 értékre beállítjuk. A reakcióelegyet 74 órán át keverjük 0 C°-on, majd a 3. a) példa szerinti módon feldolgozzuk. Kitermelés: 0,85 g. Rf Bu : Py : Ac : víz rendszerben [4 : 3/4 : : 1/4 :1] = 0,87, szilíciumdioxidon. b) Védőcsoportok eltávolítása Az a) lépésben kapott pentapeptid 0,5 g mennyiségét az 1. a) példa szerinti módon trifluorecetsavban feloldjuk. A kapott trifluorecetsavas sót t-butanol-víz elegyben feloldjuk és acetát-alakban levő Dowex X-8 ioncserélővel kezeljük. A keletkező szűrletet liofilizáljuk. így H-0-Ala-Glu-His-D-Phe. Lys—OH-acetátot kapunk. Kitermelés: 0,35 g. Rf Bu : Py : Ac : víz rendszerben [4 : 3/4 : : J/4 :1] = 0,17, szilíciumdioxidon. c) Hasonlóképpen eljárva állítjuk elő az alábbi peptid-acetátokat: 25 Dam-Glu-His-D-Phe-Lys-OH-acetát Rf = 0,29 H-Gly-Glu-His-D-Phe-Lys-OH-acetát ' Rf = 0,19 H-Val-Glu-His-D-Phe-Lys-OH-30 -acetát Rf = 0,20 H-(a-Me)-Ala-Glu-His-D-Phe-Lys-OH-acetát Rf = 0,18 35 H-Val-Glu-His-D-Phe-OH -acetát H-Ala-Glu-His-D-Phe-OH-acetát H-0-Ala-Glu-His-D-Phe-OH-acetát Dam-Glu-His-D-Phe-OH-acetát H-Met-Gln-His-D-Phe-OH-acetát Rfx =o„ szilíciumdioxidon Rfx = 0,22, szilíciumdioxidon Rf x =0,21, szilíciumdioxidon Rf x =0,31, szilíciumdioxidon Rf x = 0,29, szilíciumdioxidon 40 Rf Bu : Py : Ac : víz rendszerben [4 : 3/4 : 1/4 : 1], szilíciumdioxidon. 6. példa A-Glu-His-D-Phe-Arg-OH-acetát (ahol A jelentése H-Met, B-0-Ala, H-(a-Me)Ala, H-Gly vagy Dam) xRf Bu : Py : Ac : víz rendszerbén [4:3/4:1/4:1]. 5. példa A-Glu-His-D-Phe-Lys-OH-acetát [ahol A jelentése (3-Ala, Dam, H-Gly, H-Val vagy H-(a-Me)Ala] a)Boc-0-Ala-Glu(OtBu)-His-D-Phe-Lys(Boc)-OH 50 55 60 1,05 g Boc-0-Ala-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 -ot az 1. a) példa szerinti módon aziddá alakítunk. Az azidot H-D-Phe-Lys(Boc)-OH (3. a) példa) lehűtött 65 45 a) H-D-Phe-Arg-OH. acetát 12,8 g H-Arg(No2 )-OMe-HCl o 200ml dimetilformamiddal készített oldatát 4 C°-ra hűtjük, majd hozzáadunk 4,8 g trietilamint. A keletkező trietilamin-hidrokloridot leszűrjük, majd hozzáadunk 20 g Z-D-Phe-ONP-t. Az elegyet négy napon át keverjük 20C°-on, majd a dimetilformamidot vákuumban ledesztilláljuk és a maradékot 600 ml etilacetáttal hígítjuk. A szerves fázist citromsawal (5%), ammóniumhidroxiddal és vízzel mossuk, majd szárítjuk. Ezután az oldószert lepároljuk. A világos sárga színű maradékot etilacetát-petroléter elegyből átkristályosítjuk. Kitermelés: 24 g. Olvadáspont: 90-92 C°. Rf To : EtOH rendszerben (8:2) = 0,58, szilíciumdioxidon. Ennek az észternek 20 g-ját dioxánban feloldjuk és 2 órán át végzett keveréssel és 1,1 egyenérték nátriumhidroxid hozzáadásával elszappanosítjuk. Ezután pH = 2-re megsavanyítjuk, a dioxánt 10-szeres !
