169405. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(helyettesített)amino-3- (helyettesített)-piridazinil-tiometil -cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására
13 169405 14 bonát-oldatban feloldjuk. A kapott oldatot polisztirol-gyantával töltött oszlopra felvisszük, majd az oszlopot vízzel eluáljuk, amikor is 2,1 g 7-(2-fenil-2-hidroxf-acetamido)-3-[6'-(3'-metil-piridazinil)-tiometil]-cef-3-em-4-karbonsav-2'-oxid-nátriumsót kapunk. A termék azonos az 1. példában ismertetett módon előállított termékkel. A fentiekben említett A és B táptalaj összetétele a következő: A táptalaj: Húskivonat 10 g Pepton 10 g Nátrium-klorid 10 g Csapvíz 1 liter (pH 7) B táptalaj: Nátrium-glutamát 20 g " Élesztőkivonat 10 g Fenil-ecetsav 2 g Nátrium-klorid 2 g Kálium-dihidrogén-foszfát 1 g Magnézium-szulfát • 7 H2 O 0,2 g Csapvíz 1 liter (pH 7) 10. példa Escherichia coli (IFO-13502) 9. példában ismertetett módon előállított, mosott sejtjeit olyan mennyiségben szuszpendáljuk 10 ml 0,5 mólos cítrát-foszfát-pufferben, hogy a kapott szuszpenzióban a sejtkoncentráció az eredeti fermentlé sejtkoncentrációjának tízszerese legyen. Az így kapott szuszpenzióhoz hozzáadjuk 160 millimól 2-fenil-2-hidroxi-acetil-glicin és 80 millimól 7-amino-3-[6'-(3'-meto x i - p i r i d a z i n il )-tiometil] -4-metoxi-metoxi-karbonil-cef-3-em-l '-oxid 10 ml 0,5 mólos citrát-foszfát-pufferrel készült oldatát. A kapott keveréket keverés közben 37 C -on tartjuk 4 órán át, amikor is ezen idő elteltével a reakcióelegyben 27 millimól 7-(2-fenil-2-hidroxi-acetamido)-3-[6'-(3'-metoxi-piridazinií)-tiometil]-4-metoxi-metoxi-karbonil-cef-3-ern-l'-oxid akkumulálódik. Ezt követően a reakcióelegyet a 9. példában ismertetett módon feldolgozzik, amikor is végül 1,9 g 7-(2-fenil-2-hidroxi-acetamido)-3-[6'-(3'-metoxi-pirida z in i 1)-1 i o m e til]-cef-3-em-4-karbonsav-l'-oxid-nátriumsót kapunk. 11. példa 25 ml metilén-kloridban 500 mg 2-(3-szidon)-ecetsavat szuszpendálunk, majd a szuszpenzióhoz 1,0 g foszfor(V)-kloridot adunk. A kapott elegyet szobahőmérsékleten 30 percen át keverjük, amikor is a 2-(3-szidnon-)-acetil-klorid oldatát kapjuk. Eközben 10 ml víz és 15 ml etil-acetát elegyében feloldunk 1,24 g 7-amino-3-[6'-(3'-metil-piridazinil)-tiometil]-cef-3-em-4-karbonsav-2'-oxidot és 3,0 g nátrium-hidrogén-karbonátot, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben hozzáadjuk a fenti metilén-10 15 20 30 35 4C 50 5S 60 65 -kloridos oldatot. A reakcióelegyet ezután 0 C -on 30 percen át, majd szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük, és ezt követően a szerves oldószereket szobahőmérsékleten csökkentett nyomáson elpárologtatjuk. A maradékot 10 ml etil-acetáttal mossuk, majd a vizes fázis pH-ját híg sósavoldattal 2,5-re beállítjuk. Az ekkor kiváló csapadékot kiszűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. így 1,09 g nyers 7-[2'-(3'-szidnon)-acetamido]-3-[6"-(3"-metil-piridazinil)-tiometil]-cef-3-em-4-karbonsav-2"-oxidot kapunk. Ezt a terméket feloldjuk 5%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldatban, majd a kapott oldatot Amberlite XAD—2 márkanevű gyantával töltött oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk. A kapott eluátumot liofilizálása útján végülis a megfelelő nátriumsót kapjuk, amelynek olvadáspontja 197-198 C° (bomlik). Elemzési eredmények a C17 H I5 0 7 N 6 S 2 Na • 7/2 H 2 0 képletre: számított: talált: C =36,11%, N = 14,86%, C =36,42%, N = 14,32%. H = 3,925?, H = 3,80%, A termék infravörös abszorpciós spektrumában (kálium-bromid pasztillában felvéve) 1740 ctrT'-nél a /Maktámgyűrűre jellemző csúcs észlelhető. A termék magmágneses rezonanciaspektrumában (D2 O-ban felvéve, 100 Mc) 2,53 ppm-nél a piridazin metilhelyettesítőjének protonjaihoz rendelhető szingulett, valamint 5,19 ppm-nél, illetve 5,75 ppm-nél a 6- és 7-helyzetű protonokhoz rendelhető dublett (J = 5 eps) észlelhető. Minimális gátlási gramm/milliliter) koncentrációk: (mikro-Staphylococcus aureus 209P <0,78 Staphylococcus aureus 1840 1,56 Escherichia coli NIHJ 1,56 Klebsiella pneumoniae 1,56 45 12. példa 10 ml vízben feloldunk 701 mg 7-[2'-(3'-szidnon)-acetamido]-3-acetoximetil-cef-3-em-4-karbonsav-nátriumsót és 351 mg 3-klór-6-piridazintiol-l-oxid-nátriumsót, majd a kapott oldatot keverés közben 60 C°-on tartjuk 5 órán át. Az oldatot ezután Amberlite XAD-2 márkanevű gyantával töltött oszlopra felvisszük, majd az oszlopot vízzel eluáljuk. Az eluátumot ezután liofilizáljuk, amikor is 86 mg 7-[2'-(3'-szidnon)-acetamido]-3-[6"-(3"-klór-piridazinil)-tiometil]-cef-3-em-4-karbonsav-l"-oxid-nátriumsót kapunk. A termék 119-135 C°-on olvad bomlás közben. Elemzési eredmények a C16 Hi 2 0 7 N 6 S 2 ClNa • 7/2 H 2 0 képlet alapján: számított: C =32,80%, N = 14,34%, H = 3,27%, talált: C =33,12%, N = 13,55%. H =2,83%, 7
