169402. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefem-karbonsav-származékok előállítására

15 169402 16 1100g mennyiségben nedves sejteket különítünk el. A sejteket ezt követően ismételten* szuszpendáljuk 5 liter tiszta vízben, és felhasználásukig liofilezett állapotban tartjuk. Az így előállított mosott sejteket 10 ml 0,5 mólis citrát-foszfát-pufferben szuszpendáljuk, úgy, hogy a kapott szuszpenzió koncentrációja tízszerese legyen az eredeti fermentlé koncentrációjának. Ehhez a szuszpenzióhoz ezután 160millimól mandelil-glicint (2-fenil-2-hidroxi-acetil-glicint) és 80 millimól 7-amino-3-dezacetoxi-cefalosporánsav-metil-szulfonil-etilésztert (a szabad savat a továbbiakban „7-ADCA" rövidítéssel jelöljük) tartalmazó, 10 ml mennyiségű citrát-foszfát-puffert adunk. A kapott elegyet állandó keverés közben 4 órán át 37 C -on tartjuk, amikor is a reakcióelegyben 27,5 millimól 7-(a-fenil-a-hidroxi-acetamid o) - 3 - d ezacetoxi-cefalosporánsav-metil-szulfonil-etilészter akkumulálódik. A termék kvantitatív meghatározását polarimetriásan végeztük. 10 15 20 2. példa Az 1. példában ismertetett módon előállított Escherichia coli (IFO-13502) tenyészetből elkülö-' nített, mosott sejteket 0,2 mólos citrát-foszfát-pufferből (pH-ja 6,0) olyan mennyiségű pufferben szuszpendáljuk, hogy a kapott szuszpenzió koncentrációja az eredeti fermentlé koncentrációjának a tízszerese legyen. Eközben fenil-acetil-glicint (a továbbiakban ezt a vegyületet „PAG" rövidítéssel jelöljük) és 7-ADCA-t vagy 7-ADCA-metil-szulfonil-etilésztert oldunk fel ugyanebben a pufferoldatban, és a kapott oldatokat hozzáadjuk a fenti módon előálított sejtszuszpenziókhoz. A kapott elegyeket ezután keverés közben 37 C°-on tartjuk. A sejtek, a PAG, a 7-ADCA és a 7-ADCA-metilszulfonil-etilészter koncentrációit a reakcióelegyben az alábbi IV. táblázatban adjuk meg. A táblázatban a + jelölés arra utal, hogy a sejtek koncentrációjának megadásánál a vonatkoztatási alap a fermentlé koncentrációja volt. IV. táblázat A kísérlet sz. Sejtkoncentráció PAG koncentrációja millimólban 7-ADCA koncentrációja millimólban 7-ADCA-észter koncentrációja millimólban 1 ötszörös+ 80 40 0 2 kétszeres 80 0 40 3 ötszörös 160 80 0 4 kétszeres 160 0 80 5 ötszörös 240 120 0 6 kétszeres 240 0 120 A PAG-ból és 7-ADCA-ból előállított 7-fenil- -etilészter meghatározását úgy végezzük, hogy a -acetamido-3-dezacetoxi-cefalosporánsav mennyiségét 45 reakcióelegyhez tetrahidrofuránt adunk, majd a sejß-laktamazzal, kombinált spektrofotometriás módszerrel határoztuk meg. A PAG-ból és a 7-ADCA-metil-szulfonil-etilészterből képződött 7-fenil-acetamido-3-dez a ce toxi-cefalosporánsav-metil-szulfoniltek centrifugálás útján végzett elkülönítése után a felülúszó folyadékfázist a fentiekben ismertetett polarimetriás mérésnek vetjük alá. A kapott eredményeket az alábbi V. táblázatban adjuk meg. V. táblázat M S2 < g 15 A termék hozama különböző időpontokban millimólban (a reakció kezdetétől számított percekben) 60 90 120 180 240 Maxi- Konverzió malis a reakció konverzió végén % % 20x60 1 7,4 9,7 10,1 9,2 -- 10,0 -* 8,7 ». 8,0 -> 25 20 2 16,6 24,4 25,0 25,3 26,2 26,5 27,4 68 68 3 11,0 15,1 22,3 22,1 23,1 22,5 20,2 29 25