169383. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil H3N2 influenza-vírustörzs és az azt tartalmazó élő vírus-vakcinák előállítására
169383 1. , táblázat Szérum A" „B" C" D" E" F" „G" „H" ló >10000 >10000 <20 <20 <20 <20 <20 <20 tengerimalac >10000 M0000 <20 <20 <20 <20 <20 <20 borjú 1000 1000 <20 <20 <20 <20 <20 <20 A táblázat jelölései „A": A2 (Eng) 47/72 törzs „B": MRC-2 törzs (kiindulási rekombináns törzs) (ATCC VR 777) „C": szérum jelenlétében végzett 1. tenyésztés után „D": szérum jelenlétében végzett 2. tenyésztés után „E": szérum távollétében végzett 3. véghígításos tenyésztés után „F": Alice vírustörzs (oltóanyag) (ATCC VR 776) „G": Alice vírustörzs egylépéses továbbtenyésztésével kapott oltóanyag „H": Alice vírustörzs kétlépéses továbbtenyésztésével kapott oltóanyag A táblázat adatai szerint az oltóanyag és az abból előállított további oltóanyagok teljes mértékben rezisztensek. szérumának antitest-faktora (1/1024-es faktor) a kontroli-csoportban észlelt faktorhoz (1/8-nál na-25 gyobb faktor) viszonyítva igen magas volt. 2. Az inhibitor-rezisztens jelleg stabilitása Az Alice törzs (ATCC VR 776) inhibitor-rezisztens jellegének stabilitását tojásokon és kísérleti 30 állatokon (menyéteken) vizsgáltuk. Az embriót tartalmazó tyúktojásokon öt további sorozattenyésztési lépésnek alávetett Alice törzs (ATCC VR 776) rezisztens jellege nem változik. A menyéteken végzett vizsgálat során a 107 35 ElDso dózissal intranazális úton beoltott állatok testéből 3 nap elteltével elkülönített vírusok szer rum-inhibitorokkal szemben teljes mértékben rezisztensek maradtak. 40 3. Antigén hatás és mellékhatásmentesség vizsgálata 4 menyétből álló állatcsoport tagjait intranazális úton 10 EID50 mennyiségű Alice vírustörzzsel *5 (ATCC VR 776) oltjuk be, és 5 napon át a végbélben naponta mérjük az állatok testhőmérsékletét. Jelentős hőmérséklet-növekedést nem észleltünk, az állatok maximális testhőmérséklete 39,8 C volt. 50 Egy másik kísérletben két menyétet intranazálisan 107 EID50 mennyiségű A 2 (Eng) 42/72 alaptörzzsel oltunk be. A beoltás után 2 nappal az álatok testhőmérséklete 40,8, illetve 41,2 C volt. Egy további kísérletben két menyétet intranazá- 55 lis úton 107 EID S o mennyiségű A 2 (Victoria) 101/72 vírustörzzsel (Ausztráliában 1972-ben elkülönített influenza-vírustörzs) oltunk be. A beoltás utáni 2. napon mindkét menyétnél jelentős hőmérsékletnövekedést észleltünk: az állatok hőmérsék- 60 léte 40,5 C°-nál magasabb volt. A hemagglutináció-gátló kísérletekben megállapítottuk, hogy az inhibitor-rezisztencia nem módosítja a vírus antigén hatását menyéteken: 14 nappal az intranazális beoltás után a beoltott állatok vér- 65 2. példa Az 1. példában leírt módon előállított, fagyasztva szárított anyagot (azaz az Alice törzset) használjuk fel kiindulási anyagként a nagyüzemi vakcinatermeléshez. A fagyasztva szárított törzset embriót tartalmazó tyúktojások allantoisz-folyadékában egy lépésben tenyésztjük. A tojásokat 3 napon át 36 C -on inkubáljuk. Az allantoisz-folyadékokat elkülönítjük, egyesítjük, megvizsgáljuk sterilitásukat és alkalmazásuk biztonságos voltát, majd 5% pepton-koncentráció eléréséig peptonnal elegyítjük. A kapott elegyet 3 ml-es üvegfiolákba osztjuk szét, így egy-egy dózisegységnek megfelelő (azaz legalább 107 EID S0 mennyiségű) víruskészítményt kapunk. A terméket ezután fagyasztva szárítjuk, és a fiolákat leforrasztjuk vagy szorosan ledugaszoljuk. Az így kapott anyagot használjuk fel vakcina-alapanyagként. A vakcina beadása előtt egy fiola tartalmához 0,5 ml vizet vagy nátriumklorid-oldatot vagy 5%-os. vizes szacharóz-oldatot adunk, és a kapott folyadékot az orrüregbe cseppentjük. A peptonnal elegyített allantoisz-folyadékot nagyobb fiolákba is szétoszthatjuk, és így több dózisegységet tartalmazó készítményeket állíthatunk elő. 3. példa Alice törzsből kapott legyengített influenza vírus-vakcinával végzett vakcinás kezelés Anyagok és módszerek A kísérlethez 18-44 éves (átlagos életkor: 28 év), 32-nél sokkal kisebb H. I. antitest-faktorú egyéneket választottunk ki. A tíz kísérleti személynek 14 napos időtartamon belül kétszer adtuk be a vakcinát. A fagyasztva szárított anyagot közvetle-4
