169364. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az FR-02A antibiotikum előállítására

17 169364 18 majd az így kapott inokulum-kultúrából 1—1 ml mennyiséget átoltunk tíz 250 ml-es Erlenmeyer-lombikba, amelyekben 40 ml termelő tápközeg volt előzőleg bemérve, az alábbi összetételű, szuszpendált szilárd tápanyagoktól lényegileg mentes termelő táptalajból: Termelő tápközeg: Difco-féle tápanyag 0,8% Difco-féle élesztőkivonat 0,2% dextróz 1,0% desztillált vízben. Mindegyik lombikba, az autoklávban történő sterilizálás előtt egy csepp P—2000 habzásgátlószert adagoltunk. A fenti módon elkészített termelő tápközegeket a lombikokban azután sterilizáljuk és ezt követően oltjuk be a megfelelően lehűlt tápközeget a fentebb említett 1 ml inokulum-kultúrával. Az egyes lombikokat azután 5 napig inkubáljuk 28 C hőmérsékleten, a fentebb említett körülmények között, majd a fermentáció befejeztével a termelt antibiotikumot kinyerjük. Az FR-02A antibiotikum elkülönítése A fent leírt módon lefolytatott fermentáció befejeztével a tíz lombik tartalmát egyesítjük, az így kapott összesen 400 ml fermentlé pH-értékét sósavval 5,5-re állítjuk, majd a micélium eltávolítása végett leszűrjük a fermentlevet és a kapott tiszta szűrlethez 500 ml kloroformot adunk. Fél órai keverés után az elegyet a fázisok szétválasztása céljából centrifugáljuk, a vizes fázist elkülönítjük és kiselejtezzük. A kloroformos fázist vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk, majd vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 30 ml hexánnal mossuk, majd levegőn megszárítjuk. így termékként az FR-02A antibiotikumot kapjuk. 4. példa Az FR—02A antibiotikum termelése rázólombikos fermentációval, Streptomyces lactamdurans NRRL 3802 törzzsel A Streptomyces lactamdurans NRRL 3802 törzs liofilizált kultúráját alkalmazzuk inokulumként. Ezt a kultúrát egy 250 ml-es Erlenmeyer-lombikba visszük be, amely 40 ml első fokozatbeli tápközeget tartalmaz, az alábbi összetételben: Első fokozatbeli tápközeg: primer élesztő 1% desztillált vízben pH nátrium-hidroxiddal beállítva 7,0 Az első fokozatbeli tápközeget tartalmazó lombikot, valamint a következő termelési szakaszban alkalmazott lombikokat is 28 G hőmérsékleten inkubáljuk, percenként 220 fordulattal működtetett forgó rázókészülékben. Az első fokozatbeli tápközeget tartalmazó, beoltott lombikot két napig inkubáljuk a fent megadott körülmények között, majd az így kapott inokulum-kultúrából 1 -1 ml mennyiséget átoltunk 5 tíz Erlenmeyer-lombikba, amelyekbe előzőleg 40 ml alábbi összetételű, szuszpendált szilárd tápanyagoktól lényegileg mentes termelő tápközeget adagoltunk be: 10 Termelő tápközeg: Difco-féle tápanyag 0,8% Difco-féle élesztőkivonat 0,2% dextróz 1,0% 15 desztillált vízben. Az autoklávban történő sterilizálás előtt minden lombikhoz egy csepp P-2000 habzásgátlószert adunk. 20 Sterilizálás és lehűlés után a tápközegeket a fenti módon beoltjuk, és 5 napig inkubáljuk 28 C hőmérsékleten, a fentebb megadott körülmények között. Ezután a fermentációt befejezzük és az antibiotikumot kinyerjük. 25 Az FR-02A antibiotikum elkülönítése: A tíz termelő lombikból kapott fermentleveket egyesítjük és az így kapott összesen 400 ml fer-30 mentié pH-értékét sósavval 5,5-re állítjuk, majd a fermentlevet a micéliumok elkülönítése céljából leszűrjük. A kapott micélium-tömeget 500 ml kloroformmal extraháljuk. A kloroformos kivonatot elkülönítjük, vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk 35 és vákuumban szárazra pároljuk. A bepárlási maradékot 30 ml hexánnal mossuk, majd levegőn megszárítjuk, így az FR—02A antibiotikumot kapunk. 40 5. példa Az FR—02A antibiotikum termelése rázólombikos kultúrával, Streptomyces lactamdurans NRRL 3802 törzzsel 45 A Streptomyces lactamdurans mikroorganizmus NRRL 3802 törzsét alkalmazzuk inokulumként, liofilizált kultúra alakjában. A liofilizált kultúrát egy 250 ml-es Erlen-50 meyer-lombikban levő, alábbi összetételű 40 ml első fokozatbeli tápközeghez adjuk: Első fokozatbeli inokulum-tápközeg: 55 primer élesztő 1% desztillált vízben pH nátrium-hidroxiddal beállítva 7,0. Az első fokozatbeli inokulum-tápközeget, vala-60 mint a következő termelési szakaszban alkalmazott O tápközegeket tartalmazó lombikokat is 28 C hőmérsékleten inkubáljuk, percenként 220 fordulattal működtetett forgó rázókészülékben. Az első fokozatbeli inokulum-kultúrát 2 napig 65 inkubáljuk a fenti megadott körülmények között, 9