169326. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására aktivészteres módszerrel katalizátorok hozzáadása útján
1 25 169326 26 1,8 ml 90%-os dimetilformamidban 26 mg (60 mmol) Z-Tyr-ONp-vel 1,35 mg (lOjumól) *l-hidroxi-benzo-triazol jelenlétében reagáltatunk. 15 perc eltelte után a terméket éterrel kicsapjuk, a csapadékot leszűrjük. Éteres és metilénkloridos mosással 36 mg reakcióterméket kapunk. A reakciótermék tirozin-tartalma aminosav-analízis szerint 1,1 mól). Rf : 0,72 (30 :6 :20 :24) n-butanol/piridin/ecetsav/víz rendszerben, papírkromatográfiás analízissel. A triakontapeptid kiindulóanyag Rf értéke 0,22. (A meghatározás az előbbi módon történik.) 12. példa N<B l >-(Boc-Leu-Phe)-N (A * >, N*B29 >-bisz-Boc-inzulin 120 mg (20jLimól) N(A1) , N<B29) -bisz-Boc-inzulint [előállítása Hoppe—Seyler's Z. physiol. Chem. 352, 7 (1971)] 2 ml dimetilformamidban 16,7 mg (30/xmól) Boc-Leu-Phe-OTcp-vel és 2,7 mg (20jumól) 1-hidroxo-benzo-triazollal elkeverünk. A reakcióelegyet 10 percig szobahőmérsékleten keverjük, éterrel kicsapjuk, a csapadékot leszűrjük és éterrel mossuk. Hozam 117 mg. Aminosav analízis: Leu számított: 7,0%, talált: 6,98%, Phe számított: 4,0%, talált: 3,96%. A papírelektroforézis vizsgálatnál 2,2 pH-értéken mért vándorlási hossz: 9,76 x Inzulin N(A1) , N(B29) -bisz-Boc-inzulin, (0,84 x inzulin). A védőcsoportokat trifluorecetsawal 1 órás forralással lehasítjuk és a terméket éterrel kicsapjuk. Ekkor a vegyület ugyanúgy vándorol papírelektrofoTézisnél, mint az inzulin. A reakcióidő 1-hidroxi-benzo-triazol hozzáadása nélkül 3 óra és részben kereszttérhálósodást eredményez. Az előbbivel azonos eredményre jutunk, ha 1-hidroxi-benzo-triazol helyett a) l-hidroxi-4-metil-2-piridont, b) l-hidroxi-6-metoxi-benzo-triazolt, vagy c) l-hidroxi-5-metil-benzo-triazolt használunk. nyű etilacetát/éterrel 5,65 g (94%) csaknem kromatográfiai tisztaságú reakciótermék válik ki, amelyet teljes tisztítás céljából 200 ml 60%-os metanolból átkristályosítunk. A hozam 4,92 g (81%). A vegyület az előbb idézett szakirodalmi közlemény szerint 1-hidroxi-benzo-triazol nélkül előállított termékkel azonos, azzal a különbséggel, hogy a reakcióidő 20 óráról 15 percre csökkenthető. 10 14. példa NÍal ,el5,e26,e41 ,e46)_penta _ 15 —(Leu—Phe)—tripszin—kallikrein—inhibitor 90 mg szarvasmarhaszervekből izolált [vö. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 350, 1531 (1969)] tripszin-kallikrein-inhibitort 2 ml dimetilformamidban szuszpendálunk. A szuszpenzióhoz 56 mg Boc-Leu-Phe-OTcp-t és 13 mg 1-hidroxi-benzo-triazolt adunk. A reakcióelegyhez keverés közben vizet adunk (összesen 0,51 ml), míg az anyag teljesen feloldódik. Még 15 percig keverjük, nagyvákuumban bepároljuk és a maradékot vízmentes tetrahidrofuránnal eldörzsöljük. A csapadékot leszívatjuk és szárítjuk. Hozam 110 mg. 20 25 30 35 50 55 13. példa Boc-/JAla-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu*)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH • 4H2 0 5,36 g (4 mmol) H-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu*)-His-Phe-Trp-Gly-OH«4H20-t -amelyet a Liebigs Ann. Chem. 726 183 (1969) oldalon közöltek szerint állítunk elő - 50 ml dimetilformamidban 1,84 g (5 mmol) Boc-0-Ala-OTcp-vel 540 mg (4 mmól) 1-hidroxi-benzo-triazol jelenlétében reagáltatunk. 15 perc eltelte után 1:1 ará- 6S 60 95,7 mg fenti terméket 2 ml trifluorecetsavban oldunk. 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, bepároljuk és a maradékot víz és éter között megosztjuk, a vizes fázist „Amberlite IR45" (acetát forma) műgyantával elkeverjük és fagyasztva szárításnak vetjük alá. Hozam 86 mg. Aminosav analízis: Leu számított: 7,0%, talált: 7,3%, Phe számított: 9,0%, talált: 9,2%. 40 15. példa H-Gly-Ile-Val-Glu-Gln-OH 45 (inzulin A 1—5) szintézise I. Szilárdfázis-peptidszintézis-módszerrel 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-kinazolin felhasználásával történő előállítás a) Nps-Gln(Mbh)-polimer vegyület 12,3 g Nps-Gln(Mbh)-OH és 3,2 ml trietilamin 60 ml dimetilformamidban készült oldatát 20 g Merrifield szerint előállított [Biochemistry 3 1358 (1964)] klórmetilezett, 2% divinilbenzol térhálósított polisztirolgyantához adjuk, amelynek klórtartalma 1,15 müliekvivalens/g. A keveréket 48 óra hosszat 80 C -on rázogatjuk, majd szűrjük és a gyantát dimetilformamiddal,' etanollal és metanollal többször mossuk. A hozam vákuumos szárítás után 80C-on foszforpentoxid felett 19,3 g. Az így kapott acilaminsav-műgyanta vegyület, aminosav-tartalma 1,15 millimól/g. 13
