169253. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2. szerotipusú Herpes simplex élő vírusvakcina előállítására
7 169253 8 titere jelentős eltérést mutat a megengedett és a kikapcsoló hőmérséklet között, tovább kiónozzuk véghígításos passzálással. így összegyűjtve a 7. számú minta 10"4 hígításának pozitív csöveit a „Herpes 2 42082" (NRRL 5 5706) jelzésű törzs szuszpenzióját kapjuk. 3. példa A „Herpes 2 ts 1", NRRL 5705 deponálási 10 számú és „Herpes 2 42082" NRRL 5706 deponálási számú törzsek ts karaktere. Titrálással meghatároztuk a vírusnövekedést különböző hőmérsékleteken. Az eredményeket az I. táblázatban foglaljuk össze: a „cut off" hőmér- 15 séklet (ez az a hőmérséklet, amelyen a fertőzőképesség legalább 2 log 10 arányban csökken) - a példában 38,5 C° (±0,5C°). A „Herpes 2 ts 1" és „Herpes 2 42082", valamint a „Herpes 2 parental" (deponálási szám: NRRL 5704) törzsek közötti 20 különbséget mutatja az I. táblázat. I. táblázat „Herpes 2 ts 1", „Herpes 2 42082" és az 25 eredeti „Herpes 2 parental" törzsek közötti növekedéskülönbség különböző hőmérsékleteken (deponálási számok: mint fent) ^^ Vírus törzs Vírus kitermelés (a 35 C°-on kapott) érték %-a 37,5 38 38,5 39 „Herpes 2 ts 1" 10 10 0,1 0,0 „Herpes 2 42082" 4 0,4 0,4 0,0 „Herpes 2 parental" 100 100 100 10 30 35 4. példa A „Herpes 2 parental", NRRL 5704 deponálási számú és „Herpes 2 ts 1", NRRL 5705 deponálási számú törzsek neuro-patogén, antigén és immunogén hatása (nyulakon vizsgálva). a) „Herpes 2 ts 1" inokülálása intradermális és intramuszkuláris úton A kísérlethez 30 nyulat használtunk. Ezeket 5—5 nyulat tartalmazó csoportokra osztottuk. Az Lesöpört lml (105 > s TCID 50 ) „Herpes 2 ts 1" vírust kapott intradermálisan a hasfelület különböző helyeire, a II. csoport ugyanazt a mennyiséget kapta intramuszkulárisan a jobb hátsó lábába. A III. és IV. csoport „Herpes 2 parental" vírust kapott intradermálisan és intramuszkulárisan, az V. és VI. csoport oltatlan .kontroll csoport volt. A tüneteket naponta jegyeztük 35 napon keresztül az inokuláció után, és az ideges tünetek súlyossága szerint 0-3 értékekkel jelöltük azokat. Az eredményeket a II. táblázatban foglaljuk össze. Nem volt megfigyelhető tünet a hőre érzékeny mutánssal inokulált nyulak között. A III. csoportban két állat tünetmentes maradt, három másik különböző fokú ideges tüneteket mutatott és egyiküket (a 24. számút) leöltük az inokuláció utáni 12. napon. A IV. csoportba tartozó állatok, amelyek „Herpes 2 parental" vírust kaptak intramuszkulárisan, 7—8 napos inkubálási idő után kifejezett ideges tüneteket mutattak. Kettőt közülük (a 26. és 28. számút) leöltünk, egy az inokuláció következtében pusztult el, az inokuláció utáni 9. napon, egy múló tüneteket mutatott, de a szíven keresztül való vérvétel következtében véletlenül elpusztult az inokulációt követő 33. napon. II. táblázat „Herpes 2 ts 1" és „Herpes 2 parental" törzsekkel különböző módokon inokulált nyulakon tapasztalt ideges tünetek Csoport Törzs Állatok száma Inokuláció módja Inokulum titere (TCIDso) Ideges tüneteket mutató állatok száma, ahol a tünetek súlyossága 0 12 3 I „Herpes 2 ts 1" 5 ID l0 s,5 5 _ _ _ II 5 IM 105 ' 5 5 - - -III „Herpes 2 parental" 5 ID 105.3 2 1 1 1 IV 5 IM 105,3 -- 2 3 V + VI Kontroll 10 _ Megjegyzés: Tünetek súlyossága: 0 normális, nincs tünet, 1 kismértékű bénulás (részleges), 2 észrevehető bénulás (részleges), 3 paralízis. ID = intradermális IM = intramuszkuláris 4
