169158. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag hatásos peptidek előállítására - antidepresszáns
23 169158 24 3. példa 4. A védőcsoportok eltávolítása Ala-Glu-His-Phe-D-Lys-Trp-Y előállítása 1. Boc-Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-OH 1,05 g (2millimól) Boc-Ala-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 hidrazidból [F) 1. példa] a megfelelő azidot állítjuk elő a 2. példa 1. bekezdésében leírt módon. Ezt azazidot azután hozzáadjuk 1,23 g H-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-OH • HCl [L) 2. példa] 10 ml dimetil-formamiddal készített oldatához. Az elegy pH-értékét trietilamin hozzáadásával 7,3-ra állítjuk. A reakcióelegyet ezután 70 óra hosszat keverjük, majd szárazra pároljuk és a maradékot vizes etilacetáttal keverjük. 10 IS Az elkülönített etilacetátos réteget vízzel kétszer mossuk, majd szárazra pároljuk. A maradékot alkohol és peroxidmentes éter elegyéből átkristályosííjuk. Az 20 így kapott peptid bomlás közben 153 C°-on olvad. Rf 0,27 (szilikagélen, benzol-etanol 8 : 2 rendszerbeli). 2. Bóc-Val-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-NH2 1,11 g Boc-Val-Glu(OtBu)-His-N 2H 3 [C) 2. példa] és 1,22 g H-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-NH2 • HCl [L) 5. példa] kapcsolása útján, az 1. példában leírt módon a Boc-Val-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-NH2 peptid-amidot kapjuk. A reakcióelegyet oly módon dolgozzuk fel, hogy tízszeres mennyiségű vízbe öntjük és a kapott csapadékot etilacetát és petroléter elegyével keverjük. Hozam: 1,3 g Rf 0,84 (szilikagélen, az amilalkohol-piridin-víz 5:3:2 rendszerben). 3. Az 1. és 2. szakaszban leírttal egyező módon 40 állítjuk elő az alább felsorolt hasonló peptideket illetőleg peptid-származékokat is: 25 30 35 Peptid: Kiindulási anyagokat 45 ismertető példák: Boc-Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-OCnH^ Boc-Val-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)--Trp-OH Boc-Val-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-N(CH3 ) 2 Boc-Val-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-ÖCiiH23 Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-OH Dezamino-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Trp-OH F. 1. és L. 5.3. 50 C. 2. és L. 2. C. 2. és L. 5.2. C. 2. és L. 5.3. A. 2. és L. 2. F. 3. és L. 2. A fenti módon kapott védett peptideket az előzőkben ismertetett módon, 90%-os trifluor-ecetsawal kezeljük 1 óra hosszat (lásd 1. példa 2. bekezdés), így az alább felsorolt hexapeptideket kapjuk acetát alakjában: Peptid: Rf szilikagélen H-Ala-Glu-His-Phe-D-Lys-Trp-OH 0,23 H-Val-Glu-His-Phe-D-Lys-Trp-NH2 0,31 H-Ala-Glu-His-Phe-D-Lys-Trp-OCi,H23 0,38 H-Val-Glu-His-Phe-D-Lys-Trp-OH 0,26 H-Val-Glu-His-Phe-D-Lys-Trp-N(CH3 ) 2 0,33 H-Val-Glu-His-Phe-D-Lys-Trp-OCn H 23 0,40 H-Met-Glu-His-Phe-D-Lys-Trp-OH 0,25 Dezamino-Met-Glu-His-Phe-D-Lys-Trp-OH 0,29 (A fenti R.-értékeket butanol-piridin-ecetsav-víz 4 : 0,75 :0,25 :1 rendszerben határoztuk meg.) 4. példa H-Gly-Glu-His-Phe-D-Arg-Tra előállítása 1. Boc-Gly-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Arg-Tra 2millimól Boc-Gly-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 hidrazidot [E) 2. példa] az 1. példában leírt módon aziddá alakítunk át és ezt 2 millimól H-Phe-D-Arg-Tra-acetáttal [N) 2. példa] kapcsoljuk az előzőkben leírt módon. A reakcióelegy végső pH-értékét trietilaminnal 7,1-re állítjuk. Az elegyet 0 C° hőmérsékleten 70 óra hosszat keverjük, majd etilacetáttal hígítjuk, az etilacetátos fázist vízzel, majd vizes 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk. Az elkülönített szerves oldószeres fázist azután még egyszer vízzel mossuk, végül pedig az etilacetátot ledesztilláljuk. ^ A kapott termék Rf 0-értéke 0,39 (szilikagélen, benzol-etanol 8 : 2 rendszerben). 55 2. A védőcsoportok eltávolítása 1 g fenti módon kapott védett pepiidet 20 ml 90%-os trifluor-ecetsavban oldunk gyenge melegítéssel, majd az 1. példa 2. bekezdésében leírt módon 60 kezeljük az oldatot. Az ioncserélő gyanta kiszűrése előtt ugyancsak gyengén melegítjük a reakcióelegyet. Ily módon a H-Gly-Glu-His-Phe-D-Arg-Tra peptid acetátját kapjuk, amelynek R. értéke 0,19 (szilikagélen, a butanol-piridin-ecetsav-víz 65 4 :0,75 :0,25 :1 rendszerben). 12
