169138. lajstromszámú szabadalom • Eljárás malac-colibacillosis vakcina előállítására vemhes kocák számára

11 169138 12 III. táblázat folytatása Emse Kismalac kezelésre fertőzésre hasmenés \ kezelésre fertőzésre a kezelés és a súly állatok alkalmaállatok használt hasmenés a hasme- , morta24 órával száma zott vakszáma enterotöxin kezdete kö- nés időlitás a fertőzés cina száma fajtája zött eltelt., tartama idő, óra után 15-129 hőérzékeny + 6,4% 15-130 hőérzékeny - -+ 4,9% 15 C 15-131 hőérzékeny - . , -+13,2% 15-132 hőérzékeny - , . -• +16% 15-133 hőérzékeny — — — nincs változás 20-101 hőérzékeny 5 6 — - 3,6% 20-102 hőérzékeny 6 6 --16,5% 20-103 hőérzékeny 25 4 -- 4,5%** 20-104 hőérzékeny 19 6 -- 5,3% 20 _ 20-105 hőérzékeny 6 6 -- 4,7% 20-106 hőérzékeny 3 4-9 -nincs változás 20-107 hőérzékeny - -- 3,2% (kontroll 20-108 hőérzékeny 6 6 -- 5,7% csoport) 20-109 hőérzékeny 6 6 — - 4,2% x mastitis lépett fel 48 órával az elles után "* súlyveszteség 4 órával a hasmenés kezdete után A kísérletekből látható, hogy a vakcinával kezelt 7 alomból hatot sikerült megvédeni az E. coli 35 enterotoxinnal való orális fertőzés ellen. Az elért védettség az egyik alomnál 90%, a másik ötnél 100% volt. A kezeletlen összehasonlító állatok az azonos fertőzéssel szemben nem voltak védettek, ezeknél a mortalitás mértéke 71,4-88,8% volt. 40 A vakcinával kezelt 7 alom közül 5 esetében az összes kismalacot sikerült megvédeni, az egyik további alomnál a 10 kismalac közül nyolcat tökéletesen megvédtünk. A hőérzékeny enterotoxinnal fertőzött kezeletlen kismalacoknál az. 45 egyik alom esetében 5 állat közül ötnél jelentkeztek a betegség tipikus szimptómái, egy további alomnál 7 állatból ötnél, egy harmadiknál 9 közül nyolcnál. 50 7. példa Az 1. példa szerint előállított liofilizált enterotoxinkészítmény 12 grammját 1 liter pirogénmentes 55 desztilláltvízben szuszpendáljuk és a szuszpenziót 20 g Alhydrogel 1 liter pirogénmentes desztilláltvízben készített szuszpenziójával elegyítjük. Az elegy pH-ját N sósavoldattal 6-ra állítjuk be, majd a szuszpenziót 40 órán keresztül szobahőmérsék- 60 léten sötétben állni hagyjuk. Az enterotöxin adszorpcióját az Alhydrogelen időnkénti keveréssel segítjük elő. Az elegy végső pH-ja 6,3. A fehérjével közel azonos súlyú Alhydrogel az enterotöxin teljes mennyiségét adszorbeálta. 65 A szuszpenziót centrifugáljuk, a felülúszót elöntjük és az üledéket 2,2 liter 1 ' 1 arányú fiziológiás szérum és puffer elegyével hidratáljuk. A 6,3pH-jú puffer 100 ml-enként 22 g (0,1 mól) dinátriumhidrogénfoszfátot és 78 g (0,1 mól) káliumhidrogénfoszfátot, továbbá 10 mg thiomersalí tartalmaz. Az elegyet 2 órán keresztül 4 C°-on keverjük, majd két, egyenként 1100 ml térfogatú részre osztjuk („A" és „B" frakció). Az „A" frakciót - amely rnl-enként 5.4 mg enterotoxin-preparátumot és 9 mg Alhydrogelt tartalmaz - 5 ml-eS aliquot részletekben ampullázzuk és az ampullákat leforrasztjuk (egy ampulla 27 mg enterotoxin-preparátumot tartalmaz). A „B" frakciót 303 ml 1 :1 arányú fiziológiás szérum és előbbi puffer elegyével hígítjuk, majd további 2,7 g Alhydrogelt adunk az elegyhez. A szuszpenzióból 2,5 ml-es adagokat ampullába töltünk és az ampullákat leforrasztjuk. Az ampullák ml-enként 4,3 mg enterotoxin-preparátumot és 9 mg Alhydrogelt tartalmaznak. Az „A" és „B" sorozat szerinti vakcinák hatásosságát colibacillosis eredetű hasmenéssel fertőzött elletőállomáson vizsgáltuk. Az emséket az elles előtt 3—6 héttel a vakcina egyszeri adagjával kezeltük szubkután injekció formájában. 59 emse „A" sorozat szerinti, 28 emse „B" sorozat szerinti vakcinát kapott. 5 emsét összehasonlítóként használtunk, ezek az állatok 6