169120. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil víruskészítmények előállítására
7 169120 8 egyes mintákat két humán embrionális tüdő-kötőszövet-tenyészétbe oltjuk, a 0,1 ml térfogatú inokulumot 45 cm2 felületen oszlatjuk szét, és SPG közeggel hígítjuk. Az inokulumot a fenntartó közeggel (2% inaktivált borjúszérummal kiegészített Earle-féle alap-táptalaj) való elegyítés előtt 30 percig 35 C°-on adszorbeáltatjuk. 35 C°-on végzett 4—7 napos inkubálás után megszámláljuk a sérült centrumokat. Az eredményeket a 3. táblázatban közöljük. 3. táblázat Stabilizálószer Besugárzás előtti faktor FKE/ml Besugárzás utáni faktor FKE/ml Szűrés utáni faktor FKE/ml SPGE • KI5 28 000 600 ~nv SPGE +• K30 30 000 1000 nv SPGE + AD 30 000 1000 1000 nv • •• =' nem vizsgáltuk AD = humán albumin 4: példa A 2. példa szerint előállított, ultrahang-besugárzással kezelt sejtmentes anyagot 3 ml-es üvegfiotákba töltjük. Egy-egy fiolába 0,5 ml sejtmentes anyagot töltünk. Ez a mennyiség 250-1 000 dózis Marek-féle megbetegedés elleni vakcinának felel meg. A fiolák tartalmát fagyasztva szárítjuk, majd a fiolákat lezárjuk, és -20 C°-on tároljuk. Felhasználás előtt a vakcinát 0,2 ml/dózisegység aranyban a következő összetételű stabilizáló kompozícióval hígítjuk: 74,6 g szacharóz, 0,52 g kálium-dihidrogénfoszfát, 1 g dinátrium-hidrogénfoszfát, 0,8 g monokálium-glutamát, desztillált víz ad 1 liter. Az így kapott, Marek-féle megbetegedés elleni vakcinát intramuszkulárisan vagy szubkután adhatjuk be. 5. példa A3, példában kapott, ultrahang-besugárzással kezelt, sejtmentes anyagot 3 ml-es üvegfiolákba S töltjük. Egy-egy fiolába 0,5 ml sejtmentes anyagot töltünk, ez a mennyiség egy vakcina-dózisegységnek felel meg. A fiolák tartalmát fagyasztva szárítjuk, majd a fiolákat lezárjuk és -20 C°-on tároljuk. 10 Felhasználás előtt a vakcinát 0,5 ml/dózisegység arányban pirogén anyagot nem tartalmazó desztillált vízzel hígítjuk. Az így kapott varicella zoster vírus-vakcinát parenterálisan adjuk be. 15 20 25 A táblázat adataiból kitűnik, hogy a polivinil- 30 -pirrolidon stabilizáló hatása nagyságrendileg azonos a humán albuminéval. 35 40 45 50 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az FC-126 pulyka-herpesvírus (ATCC Vr No. 584) vagy a The Wistar Institute törzsgyűjteményben „Temple" néven letétbe helyezett varicella zoster vírustörzs életképes, stabil szuszpenziójának vagy liofilizátumának előállítására valamely ke ményítő-származékot, glutaminsav-alkálifémsót vagy -alkáliföldfémsót, kétvegyértékű fémkationokkal kelátot képező anyagot és pufferanyagot tartalmazó stabilizálószer felhasználásával, sejthez kötött ATCC Vr No. 584 vírustörzzsel megfertőzött csirkeembrió-kötőszövet-sejtekbol, illetve „Temple" vírustörzzsel megfertőzött WI-38 sejtekből kiindulva, azzal jellemezve, hogy a sejteket 0,1 - 10%, legföljebb 40 000 átlagos molekulasúlyú polivinil-pirrolidont, 2-10% keményítő-származékot, 0,05 - 0,2% glutaminsav-alkálifémsót vagy -alkáliföldfémsót és 0,1 - 0,5%, kétvegyértékű fémkationokkal kelátot képező anyagot tartalmazó, pufferolt, 6,5 és 7,5 közötti pH-értékű vizes oldattal keverjük össze, a kapott, legalább 104 sejt/milliliter koncentrációjú szuszpenzióban ismert módon elroncsoljuk a megfertőzött sejteket, majd a felülúszóként kapott szuszpenziót, amely a felszabadult életképes érintetlen vírusokat tartalmazza, elválasztjuk az üledékként kivált elroncsolt sejtanyagtól, és ezt a vírus-szuszpenziót kívánt esetben ismert módon liofilizáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy körülbelül 10 000-40 000 átlagos molekulasúlyú polivinil-pirrolidont használunk fel. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 774285 - Zrínyi Nyomda
