169116. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antigén, haptén vagy antitest kimutatására és meghatározására
15 c) Immunoglobulin G meghatározása 169116 16 A vizsgálatot az 1. példa 4. pontja szerint végezzük azonos immunoabszorbenst alkalmazva. Az enzimaktivitást a hidrolízist követően szobahőmérsékleten végezzük. A vizsgálathoz 2,5 mmólos p-nitrofenilfoszfátot alkalmazunk 9,8 pH-jú 0,05 mól-os nátriumkarbonát puffer-oldatban. Az oldat 1 mmól MgCl2 -t tartalmaz. A ,szín intenzitás változását 400 nm-en mérjük. Az eljárás segítségével 10ng/ml humán immunoglobulin G kimutatható. 7. példa Tesztoszteron meghatározása a) Tesztoszteron-hexokináz előállítása (haptén-enzimkomplex) 50 mg tesztoszteron-3-(0-karboximetil)-oximot (Organon-készítmény) 150 mg hexokinázzal (Boehringer-készítmény) elegyítünk a 3. példa a) lépése szerint. c) Tesztoszteron-antitest előállítása (haptén-antitest) A tesztoszteron-albumin konjugátummal egy juhot immunizálunk. A művelet során a 3. példa c) lépése szerint járunk el. d) Tesztoszteron meghatározása A tesztoszteron meghatározást a 3. példa f) lépésében leírt ösztradiol meghatározás szerint végezzük. Az enzimaktivitás mérést úgy végezzük, hogy a vizsgálandó anyagból 0,1 ml-t 3 ml alábbi összetételű oldattal hozzuk össze: 1,27 ml trietanolamin-puffer-oldat (0,05 mól, pH : 7,6), 1,20 ml glukóz (100 mg/ml puffer-oldatban), 0,20 ml 0,1 Ml MgCl2 , 0,20 ml NADP (nátriumsó), 10 mg/ml, 0,20 ml ATP (nátriumsó), 10 mg/ml. A szín intenzitás-változását 310 nm-en mérjük. Az eljárás segítségével 6 ng/ml tesztoszteron kimutatható. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás antigén- hapten vagy antitest kimutatására és/vagy kvantitatív meghatározására, azzal jellemezve, hogy 10 15 a) valamely antigén vagy hapten kimutatására és/vagy kvantitatív meghatározására a meghatározandó antigén vagy hapten oldatához ismert mennyiségű antitestet és egy enzimnek, előnyösen olyan enzimnek, amelynek aktivitása kolorimetriásan mérhető, a meghatározandó antigénnel vagy hapténnel előzőleg elkészített ismert mennyiségű, konjugátumát, majd egy szilárd állapotú, oldhatatlan anti-antitestet adunk, a szilárd fázist az oldattól elkülönítjük, és az enzimaktivitást az oldatban és/vagy a szilárd fázisban meghatározzuk, vagy b) valamely antitest kimutatására és/vagy kvantitatív meghatározására a meghatározandó antitest oldatához feleslegben egy enzimnek, előnyösen olyan enzimnek, amelynek aktivitása kolorimetriásan mérhető, egy antigénnel vagy hapténnal előzőleg elkészített ismert mennyiségű konjugátumát, majd szilárd állapotú oldhatatlan anti-antitestet 7f) adunk, ezt követően a szilárd fázist elkülönítjük, és az enzimaktivitást és oldatban és/vagy a szilárd fázisban meghatározzuk. 2. Próbacsomag antigén vagy hapten kimuta-25 tására és/vagy kvantitatív meghatározására az 1. igénypont a) változata szerint, azzal jellemezve, hogy az a) az antigén (vagy hapten) és egy enzim kon-30 jugátumának ismert mennyiségéből, b) ismert mennyiségű antitestből, c) oldhatatlan anti-antitestből, d) az enzimaktivitás meghatározásához szükséges reagensből áll. 35 40 45 50 55 3. Próbacsomag antitest kimutatására és meghatározására az 1. igénypont b) változata szerint, azzal jellemezvej hogy az a) antigén (vagy hapten) és egy enzim konjugátumának ismert mennyiségéből, b) anti-antitestből, c) az enzimaktivitás meghatározásához szükséges reagensből áll. 4. A 2. igénypont szerinti próbacsomag kiviteli alakja a terhességre jellemző HCG antigén kimutatására, azzal jellemezve, hogy liofilizált rétegek alakjában a készítmény a) HCG antigén és egy enzim, előnyösen peroxidáz konjugátumának ismert mennyiségéből, b) ismert mennyiségű antí-HCG-ből, c) szilárd állapotú anti-antitestből, d) az enzimaktivitás meghatározásához szükséges reagensből áll. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 774285 - Zrínyi Nyomda
